FITC-Zymosan，异硫氰酸荧光素标记酵母多糖的纯化方法

酵母多糖（Zymosan）是一种来源于酵母细胞壁的多糖复合物，主要由β-葡聚糖、甘露聚糖及少量蛋白质组成，常用于免疫学研究、巨噬细胞活化及炎症模型构建。为了实现其在细胞和体内的可视化，研究者常通过异硫氰酸荧光素（FITC）对Zymosan进行荧光标记，制备FITC-Zymosan。FITC的异硫氰酸基团（–N=C=S）可与Zymosan中蛋白质或多糖上的伯氨基反应，形成稳定的硫脲键，实现荧光功能化。

1. 反应与偶联原理

FITC标记Zymosan的关键在于利用多糖颗粒表面的氨基或羟基位点与FITC反应。通常Zymosan经过水或缓冲液分散，适当调整pH至8.0–9.0，保证氨基处于去质子化状态，以增强亲核性。FITC以有机溶剂或混合溶剂溶解后缓慢加入Zymosan悬浮液，在温和搅拌下进行反应，生成–NH–C(=S)–NH–硫脲连接，实现荧光标记。

2. 纯化方法

FITC-Zymosan的纯化主要目的是去除未反应的自由FITC、低分子副产物及溶剂残留。常用的纯化方法包括：

反复离心洗涤：利用Zymosan颗粒的固相特性，将反应混合物离心沉降，去除上清液中的游离FITC，重复多次直至上清液几乎无荧光。

透析：将反应产物置于适宜分子量截断的透析袋中，利用水或缓冲液连续更换，实现低分子荧光素的扩散去除。

凝胶过滤柱：在某些高精度应用中，采用葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶柱对FITC-Zymosan进行分离，可进一步去除游离FITC及低分子杂质。

3. 表征

为了确认FITC标记的成功及产物的性质，常用的表征方法包括：

荧光光谱分析：测定FITC-Zymosan的吸收峰（约495 nm）和发射峰（约520 nm），比较标记前后的荧光变化，确认荧光引入。

紫外-可见光谱（UV-Vis）：记录FITC与Zymosan混合后的吸收峰变化，可初步判断偶联效率。

动态光散射（DLS）和粒径分析：评价标记后Zymosan颗粒的平均粒径、分布及表面性质，确保颗粒未聚集或膨胀。

红外光谱（FTIR）：通过观察–NH–C(=S)–NH–硫脲键特征峰的出现，确认化学键的形成。

显微荧光成像：利用共聚焦显微镜观察FITC-Zymosan颗粒的荧光分布和均一性，验证标记效果。

产品名称：FITC-Zymosan，异硫氰酸荧光素标记酵母多糖

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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