Cy5.5-活性酯（Cy5.5-NHS Ester）是一种基于花青素结构的近红外荧光染料活性衍生物，其核心为Cyanine 5.5（简称Cy5.5）染料，通过在分子末端引入N-羟基琥珀酰亚胺酯（N-hydroxysuccinimide ester, NHS ester）官能团形成的活性酯化合物。该试剂具有优异的近红外荧光特性和良好的生物共价标记活性，是生物偶联化学、体内成像、蛋白质标记及纳米探针制备中的关键荧光标记分子之一。

一、化学结构与理化特性
Cy5.5染料属于多甲烯花青素（Cyanine）系列，是由两个吲哚或苯并吲哚环通过共轭多烯链连接而成的对称性分子。其结构中含有长程共轭体系，使其具有强烈的近红外吸收和发射特征。Cy5.5的激发波长约为675 nm，发射波长约为694 nm，荧光量子产率高，背景干扰低，尤其适合用于组织或小动物体内成像。

NHS活性酯（–CO–O–NHS）基团是常见的亲电活化基团，可与胺类（–NH₂）分子发生高效反应，形成稳定的酰胺键。通过将NHS酯引入Cy5.5染料，可使其方便地与含氨基的生物分子（如蛋白质、肽、抗体、核酸、纳米颗粒表面胺基等）发生共价偶联，得到稳定的荧光标记产物。

Cy5.5-NHS通常以干粉或溶液形式供应，溶于DMSO、DMF或少量无水乙腈中。由于其对水分敏感，必须在无水、避光条件下储存，一般推荐在–20°C下密封保存。

名称：Cy5.5-活性酯

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

供应：西安齐岳生物科技有限公司

二、制备原理
Cy5.5-NHS的制备一般通过活化Cy5.5染料末端的羧基实现。首先，在无水有机溶剂中利用偶联试剂（如DCC或EDC）使羧基与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）反应，生成NHS酯。该反应过程需在惰性气体保护下进行，避免水分或酸性物质破坏活性酯结构。生成的Cy5.5-NHS经纯化后即得高纯度活性酯粉末，可直接用于生物偶联反应。

三、光学性质与优势
Cy5.5-NHS具有优异的光学性能：

荧光颜色：深红至近红外

光稳定性：优良，耐光漂白

水溶性：中等，可通过引入磺酸基或PEG链增强亲水性

Cy5.5的近红外发射光使其在生物组织中穿透能力强，背景自发荧光低，信噪比高，非常适合活体荧光成像与深层组织检测。与传统可见光染料（如FITC或Cy3）相比，Cy5.5信号更清晰、衰减更慢，在多通道荧光成像中也具有良好的光谱区分度。

四、生物学应用

蛋白质与抗体标记：
Cy5.5-NHS用途是与蛋白质或抗体的胺基（尤其是赖氨酸残基）反应，生成稳定的荧光标记抗体（如Cy5.5-IgG）。这些标记物可用于免疫荧光显微镜、流式细胞术（FACS）、Western blot等检测。

体内荧光成像：
由于Cy5.5发射在近红外区域（NIR），能够穿透组织5–10毫米，常被用于小动物活体成像，如肿瘤靶向探针、药物递送跟踪、血管成像或炎症检测。其低背景干扰特性可显著提升图像对比度。

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