5'-azido NHS Ester，5'-叠氮-活性酯的反应机理

5'-Azido NHS Ester是一种功能化化学试剂，主要由以下两部分组成：

NHS酯活性基团（N-hydroxysuccinimide ester）

可与蛋白质或多肽上的伯胺（–NH₂）反应，形成稳定的酰胺键。

高选择性和温和反应条件，适用于生物体系。

5'-Azido（叠氮）功能团

在分子末端引入叠氮基团（–N₃），可参与“点击化学”反应，如CuAAC（铜催化叠氮-炔烃环加成）或SPAAC（铜自由点击化学）。

提供了二级功能化位点，可与炔基荧光染料、药物分子或生物分子偶联。

应用领域：

蛋白质组学：用于蛋白质标记、富集及质谱分析。

细胞成像：通过荧光点击偶联实现蛋白或糖链可视化。

靶向药物开发：结合靶向载体实现化学修饰和药物递送。

2. 反应机理

5'-Azido NHS Ester的反应可以分为两步：NHS酯偶联反应和叠氮点击偶联反应。

(1) NHS酯偶联反应

机理概述

伯胺作为亲核试剂攻击NHS酯羰基碳。

形成四面体过渡态，中间体中NHS基团作为离去基团脱离。

生成稳定的酰胺键，实现分子与蛋白质、抗体或多肽的共价偶联。

反应条件

溶剂：干燥DMSO或DMF溶解NHS酯，反应于水相缓冲液（PBS或HEPES pH 7–8）。

温度：室温即可完成。

时间：1–4小时，依赖底物浓度和伯胺可用性。

特性

高选择性：NHS酯优先与伯胺反应，不干扰羧基或羟基。

温和条件：适合蛋白质和活细胞体系。

可控性：通过摩尔比和缓冲体系控制偶联度。

(2) 叠氮点击偶联（Click Chemistry）

CuAAC（铜催化叠氮-炔烃环加成）

叠氮基团与炔基分子在Cu(I)催化下发生[3+2]环加成，形成稳定1,2,3-三唑环。

高选择性、高效率，反应温和，可在水相或有机溶剂体系完成。

SPAAC（铜自由点击）

利用环张力炔基（如DBCO或BCN）与叠氮反应，不需要铜催化剂，降低对蛋白质或细胞。

在生物体或活细胞体系中更安全。

二级功能化优势

可在蛋白质、抗体或多肽偶联后进一步标记荧光染料、药物分子或生物活性分子。

实现蛋白质+荧光探针/药物的多功能化。

3. 应用实例

蛋白质组学

偶联5'-Azido NHS Ester到蛋白质表面赖氨酸残基。

随后点击荧光或生物素标记，实现蛋白富集、追踪及质谱分析。

细胞成像

蛋白或糖链经5'-Azido NHS Ester修饰后，与炔基荧光探针点击偶联。

通过荧光显微镜观察细胞膜或胞内蛋白分布。

靶向药物开发

偶联至靶向抗体或纳米载体表面。

叠氮位点进一步与药物分子点击偶联，实现可追踪的靶向药物递送系统。

产品名称：5'-Azido NHS Ester

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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