iFluor 700 Styramide,近红外荧光标记化合物的反应步骤概述
iFluor 700 Styramide 是一种近红外荧光标记化合物,专为蛋白质、抗体和核酸分子的共价标记设计。其核心结构由 iFluor 700 荧光染料和 Styramide(苯乙烯胺)反应基团组成,可通过 HRP(辣根过氧化物酶)催化实现自由基介导的共价偶联,用于免疫组化、免疫荧光染色和信号放大实验。
化学结构与特性
iFluor 700 荧光核心
激发峰约 690–700 nm,发射峰约 710–720 nm,位于近红外区域。
远红/近红光减少样品自发荧光干扰,适合多通道成像。
光稳定性高,适用于长时间荧光观察。
Styramide 基团
可被 HRP 催化形成自由基,迅速与蛋白质或抗体酪氨酸残基共价偶联。
提供高效信号放大能力,适合低丰度蛋白检测。
反应步骤概述
样品准备
将待标记蛋白或抗体固定在固相载体(如细胞、组织切片)上。
使用缓冲液(PBS、Tris-HCl 等)调整 pH,使其适合 HRP 反应。
HRP 介导的氧化反应
加入 HRP(辣根过氧化物酶)与 H₂O₂ 作为氧化剂。
Styramide 被氧化生成自由基,活化态苯环可迅速攻击邻近蛋白质的酪氨酸残基,形成稳定的共价键。
荧光偶联
自由基攻击蛋白质后,iFluor 700 荧光核心与蛋白质共价结合。
反应时间通常在数分钟至半小时之间,根据蛋白丰度和信号需求调整。
终止与洗涤
反应完成后,通过 PBS 或含蛋白封闭剂的缓冲液洗去未反应的染料。
确保信号特异性,降低非特异性背景。
应用与检测
适用于免疫组化(IHC)、免疫荧光(IF)、Western blot 信号放大。
近红外荧光特性支持深层组织成像和多通道共染实验。
注意事项
反应需在避光条件下进行,避免荧光猝灭。
HRP 和 H₂O₂ 浓度需优化,以防过度氧化蛋白或破坏样品结构。
产品名称:iFluor 700 Styramide
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物
关于我们
齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。
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