Cy3.5-NHS 花青素Cy3.5-N-羟基琥珀酰亚胺酯的主要应用领域-UDP糖丨MOF丨金属有机框架丨聚集诱导发光丨荧光标记推荐西安齐岳生物

Cy3.5-NHS，全称为 Cyanine3.5 N-hydroxysuccinimide ester（Cy3.5-N-羟基琥珀酰亚胺酯），是一种基于半花青染料（hemicyanine）结构的红色荧光标记试剂。该化合物属于经典的Cyanine系列荧光染料家族，是Cy3与Cy5之间的中间波长成员，具有较长的吸收与发射波长、更高的光稳定性以及较好的水溶性和标记效率。由于其含有活性酯（NHS ester）官能团，Cy3.5-NHS可与含伯胺（–NH₂）基团的分子，如蛋白质、肽、多肽、核苷酸及其他生物大分子，发生高效的共价偶联反应，从而实现生物分子的荧光标记。

反应机理与标记原理

Cy3.5-NHS 的活性酯基团可以与伯胺反应生成稳定的酰胺键。这一反应属于典型的亲核取代过程，在pH 7.5–8.5的缓冲体系（如0.1 M NaHCO₃或PBS缓冲液）中高效。
反应机理如下：

目标分子（如蛋白质）的赖氨酸残基或末端氨基提供亲核氮原子。

氨基攻击NHS酯的羰基碳，释放N-羟基琥珀酰亚胺副产物。

生成稳定的 –CO–NH– 酰胺键，实现共价连接。

主要应用领域

蛋白质与抗体标记
Cy3.5-NHS可高效标记抗体、酶、受体蛋白等生物分子，用于免疫荧光（IF）、免疫印迹（WB）及ELISA检测。标记后信号稳定且发射光强均一，适合多重荧光成像。

核酸与寡核苷酸标记
通过氨基修饰的寡核苷酸（如5'-NH₂修饰DNA），可与Cy3.5-NHS反应生成荧光探针，用于原位杂交（FISH）、qPCR探针及核酸传感器。

流式细胞术与共聚焦显微镜
Cy3.5具有亮度高、光漂白慢的优点，可用于流式分析、活细胞追踪及共聚焦显微镜成像，与Cy3、Cy5等染料形成清晰分辨的通道组合。

生物传感与纳米材料标记
Cy3.5-NHS还可用于功能化纳米颗粒、聚合物载体及脂质体表面，使这些材料具备可视化或可追踪特性，在药物传递、诊断探针及生物成像领域中应用广泛。

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