产品名称:CAS 1686147-55-6,吲哚菁绿-氨基,ICG-NH₂的核心功能与应用场景
FITC标记转铁蛋白的基本原理
转铁蛋白(Transferrin, Tf):转铁蛋白是一种单链糖蛋白,含有两个铁结合位点,能够特异性地结合并转运铁离子。它通过与细胞表面的转铁蛋白受体结合进入细胞,是铁离子运输过程中的关键蛋白。
FITC(荧光异硫氰酸荧光素):FITC是一种常用的荧光标记分子,具有较强的绿色荧光特性。当FITC与转铁蛋白结合后,FITC就能够作为荧光探针,通过激发-发射过程提供强烈的绿色荧光信号,从而方便地在荧光显微镜或流式细胞仪中检测。
FITC标记转铁蛋白的步骤
准备FITC溶液:
FITC通常以固体形式存在,需要将其溶解在适当的溶剂中,常用的溶剂为二甲基亚硫酰胺(DMSO)或无水乙醇,浓度一般在1–5 mg/mL之间。
准备转铁蛋白溶液:
将转铁蛋白(一般购买商业化产品)溶解在适当的缓冲液中,常用的缓冲液为PBS(磷酸盐缓冲液),pH通常调至7.4。
反应体系配置:
将FITC与转铁蛋白以一定的摩尔比混合。一般推荐使用的FITC与转铁蛋白的摩尔比为5:1到10:1,以确保足够的FITC标记。
在混合反应体系时,通常需要保证溶液pH值在8.0–9.0之间,因为此pH条件下FITC的反应活性较高。
可以在暗室中操作,避免光照使FITC发生降解。
反应时间和条件:
反应时间通常为1–2小时,反应温度可选择室温或4°C(冰上反应)。较低的温度有助于减少非特异性反应。
终止反应:
反应完成后,通过透析、凝胶过滤或离心沉淀去除未反应的FITC以及其他小分子杂质,纯化FITC标记的转铁蛋白。
标记效果确认:
纯化后的FITC标记转铁蛋白可以通过紫外可见光谱(UV-Vis)或荧光分光光度计检测其荧光特性,确认FITC的标记效率。
通常,FITC标记的转铁蛋白在495 nm激发下具有强烈的520 nm发射光。

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