产品名称:AF647活性酯,Alexa Fluor 647 NHS ester的核心特性与综合应用
1. 结构与分子基础
分子标识:分子式 C₄₀H₄₉N₃O₁₆S₄,分子量 956.09 g/mol。由Alexa Fluor 647(近红外荧光团)与N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS ester)通过短连接子共价结合,NHS酯基团特异性识别生物分子中的氨基(-NH₂),形成稳定酰胺键。
光学特性:激发波长 650 nm,发射波长 665-672 nm(近红外区域),量子产率 0.33-0.35,光稳定性良好(比传统Cy5高2倍),组织穿透深度达1-1.5 cm,pH 4.0-10.0范围内荧光强度稳定,抗生物自体荧光干扰。
2. 物理性质与稳定性
外观与溶解性:深紫色/蓝色固体粉末,易溶于DMSO、DMF(溶解度>120 mg/mL),难溶于水(需DMSO助溶后稀释)。溶液呈深蓝色,650 nm激发下发出强荧光,强光下易光漂白,需避光操作。
储存条件:-20℃避光干燥保存,避免反复冻融;溶液状态需-80℃短期保存(<1个月),NHS酯在水相中半衰期约2小时,需现配现用。
3. 反应活性与偶联机制
NHS酯反应:在pH 7.2-7.5、室温条件下,与蛋白质、抗体、肽、核酸等生物分子的氨基快速反应(1-4小时),形成稳定酰胺键,偶联效率>90%,不影响生物分子活性。
生物正交性:适配多色成像(如与Alexa Fluor 488、Cy5联用),支持FRET(荧光共振能量转移)实验、蛋白质相互作用研究及药物递送系统追踪。
反应优化:需控制反应物浓度、温度及pH,避免氧化剂干扰;纯化步骤(如透析、HPLC)可去除游离染料。
4. 核心应用场景
生物成像与标记:
活细胞/活体成像:标记抗体追踪肿瘤生长与转移,共聚焦显微镜观察细胞器(如线粒体、溶酶体)动态,流式细胞术检测细胞表面抗原。
超分辨率成像:如STORM技术研究细胞内蛋白分布,多色成像实现亚细胞结构共定位。
分子检测与探针开发:
免疫分析:免疫荧光染色、ELISA、Western blot中标记抗体,提升检测灵敏度。
核酸标记:标记DNA/RNA探针用于FISH(荧光原位杂交)或基因表达分析。
药物递送:构建靶向载体(如脂质体、纳米颗粒),监测药物分布与释放动力学。
材料科学与工程:修饰纳米材料、生物芯片,开发高灵敏度检测平台。

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