英文名称:Peroxidase, Horseradish-Amine,HRP-NH₂
中文名称:辣根过氧化物酶-氨基修饰物
HRP-NH₂是通过化学修饰在辣根过氧化物酶(HRP)分子表面引入氨基(–NH₂)的功能化衍生物。辣根过氧化物酶是一种天然植物氧化酶,具有催化过氧化氢(H₂O₂)分解并氧化底物的特性,常用于生物检测与标记领域。氨基修饰显著增强了其反应活性,使其能够通过共价键与羧基、活性酯或巯基等基团结合,形成稳定的偶联物。这种修饰保留了HRP的催化活性,同时拓展了其在生物医学研究中的应用场景。
HRP-NH₂的制备通常采用化学偶联法,通过戊二醛或交联剂将氨基引入酶分子表面。修饰后的酶分子表面暴露多个活性位点,可与抗体、蛋白质或多糖等生物分子定向结合,形成酶-生物分子复合物。例如,在酶联免疫吸附试验(ELISA)中,HRP-NH₂可通过氨基与抗体表面的羧基反应,实现酶标记抗体的制备,提升检测灵敏度。此外,其还可用于蛋白质印迹(Western Blot)中的信号放大,通过催化底物显色实现目标蛋白的定性定量分析。
在储存与使用方面,HRP-NH₂需严格遵循低温避光条件,通常以冻干粉形式保存于-20℃环境,溶解后需分装并避免反复冻融。实验中需根据具体需求调整浓度,例如在ELISA中常用浓度为1:1000-1:5000,需通过预实验优化条件。其稳定性受pH、离子强度及缓冲体系影响,推荐使用磷酸盐缓冲液(PBS)维持酶活性。
HRP-NH₂的衍生产品包括HRP-PEG-NH₂(聚乙二醇修饰型)和HRP-TCO(反式环辛烯修饰型),前者通过PEG链延长酶分子半衰期,后者用于生物正交反应中的快速偶联。这些变体进一步拓展了HRP-NH₂在活体成像与靶向递送中的应用潜力。

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