4-ARM-PEG-Fluorescein(2)，四臂聚乙二醇-荧光素衍生物的反应步骤

四臂聚乙二醇-荧光素（4-ARM-PEG-Fluorescein）是一类通过将荧光染料荧光素（Fluorescein）连接至四臂聚乙二醇（4-ARM-PEG）末端而得到的高分子荧光化学材料。该结构兼具PEG骨架的水溶性和柔性，以及荧光素的光学标记特性，可用于高分子示踪、界面标记和纳米材料构建等研究场景。其合成过程主要包括末端活化、荧光素接枝反应以及多级纯化与表征步骤。

一、前体激活与反应设计

典型起始原料为四臂PEG-OH或四臂PEG-NHS。若采用四臂PEG-OH，则需要先对羟基进行活化，使其能够与荧光素分子中的羧基或氨基反应。常见活化方式包括：

• 使用**对甲苯磺酰氯（TsCl）或甲磺酰氯（MsCl）**将末端羟基转化为磺酸酯，提高反应活性；

• 或通过氯甲酸酯化形成PEG-活性碳酸酯中间体；

• 若采用四臂PEG-NHS，则可直接与荧光素-胺或荧光素-氨基衍生物发生酰胺键偶联。

在设计阶段需控制水分与氧气，避免NHS酯水解或染料氧化。其溶剂通常选择DMF、DMSO或无水THF，以保证体系均一性与溶解能力。

二、荧光素接枝反应步骤

1. 溶解反应物

• 四臂PEG前体溶于无水溶剂

• 荧光素或改性荧光素（如Fluorescein-amine、Fluorescein-hydrazide）溶解于弱碱中（如三乙胺或DIPEA辅助）

2. 偶联反应

• 采用轻微加热（25–40°C）、避光条件进行反应

• 反应时间一般为6–24小时

• 过程中可通过TLC或UV-Vis监控荧光素剩余量

反应机理主要为核亲电反应或缩合反应，形成稳定酯键或酰胺键，从而实现荧光标记。由于荧光素具有共轭结构，避免强酸或强碱条件以防止其结构变化。

三、纯化过程

纯化是关键步骤，目标为移除自由染料、溶剂与低分子杂质。常用策略包括：

1. 沉淀法

• 使用乙醚、冰冷甲醇或丙酮沉淀PEG

• 离心分离目标物

2. 透析

• 使用MWCO 3k–10k透析袋

• 透析水或缓冲液更换数次

• 条件需避光，防止光漂白

3. 色谱精制（可选）

• 凝胶过滤层析（GFC）分离自由荧光素

• 反相层析用于提高纯度

纯化步骤中需避免高温、强光及氧化环境，以维持荧光性质与分子结构完整性。

四、产物干燥与保存

• 冷冻干燥获得固体样品

• 避光、低温储存（如–20°C）

• 密封环境避免湿气引入导致降解

产品名称：4-ARM-PEG-Fluorescein

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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