ATTO 680 NHS Ester，ATTO 680 活性酯的反应原理

ATTO 680 NHS Ester（ATTO 680 活性酯）是一种红色荧光标记试剂，属于ATTO染料系列。其荧光团激发峰约为680纳米，发射峰约为700纳米，位于可见光红光至近红外区，具有高量子产率、良好的光稳定性以及低自体荧光干扰特性。ATTO 680 NHS Ester在生物标记、荧光探针构建和多通道成像实验中应用广泛，能够对蛋白质、多肽、寡核苷酸及其他含伯胺官能团的生物分子进行共价标记。NHS酯（N-hydroxysuccinimide ester）末端活性基团赋予染料高化学反应活性，可与伯胺发生选择性亲核反应，形成稳定的酰胺键，从而实现荧光标记和生物分子功能化。

反应原理

ATTO 680 NHS Ester的标记反应核心原理是NHS酯与伯胺的亲核取代反应，其化学机制属于酰胺键形成反应。NHS酯分子末端的碳酰基（C=O）与伯胺的氨基（–NH₂）发生亲核攻击，N-羟基琥珀酰亚胺作为良好离去基团被置换，从而生成稳定的酰胺键连接荧光团与生物大分子。

在反应过程中，伯胺首先需处于去质子化状态以增强亲核性。通常在弱碱性缓冲液（pH 7.5–8.5）中进行反应，此时伯胺部分去质子化，能够高效攻击NHS酯的羰基碳原子。碳原子与伯胺形成过渡态，随后NHS离去，形成共价酰胺键。整个过程温和、无需催化剂，对生物分子结构破坏较小，适合蛋白质和敏感分子的标记。

反应效率与条件密切相关。pH值控制在7.5至8.5既可保证伯胺亲核性，又能降低NHS酯水解速率。如果pH偏低，伯胺被质子化，亲核能力下降，反应速率降低；若pH过高，NHS酯易被水水解，生成非活性羧酸，从而降低标记效率。溶剂体系也影响反应：ATTO 680 NHS Ester通常溶于极性有机溶剂（如二甲基亚砜或二甲基甲酰胺）以保证溶解性，而目标蛋白或生物分子溶解于缓冲液中，通过混合有机/水相体系进行反应，可兼顾染料溶解性和生物分子活性。

温度和反应时间对标记效果亦有影响。通常在室温下反应30分钟至2小时即可完成；对于热敏感蛋白，可选择低温（如4℃）延长反应时间，以保持生物活性。反应摩尔比可根据目标分子氨基数量和所需标记密度进行调整，一般在5:1至20:1之间。

完成反应后，通常加入含氨基的小分子（如甘氨酸或Tris）封闭未反应的NHS酯，防止非特异性标记。产物纯化可通过透析、凝胶过滤或高效液相色谱（HPLC）去除未反应的染料和副产物，从而得到高纯度的ATTO 680标记物。纯化后产物在低温避光条件下储存，以保持荧光活性。

ATTO 680 NHS Ester反应原理的特点在于高选择性、高效率和温和条件。其NHS酯与伯胺的特异性反应可避免与羟基、巯基或其他官能团的副反应，同时形成稳定酰胺键，保证标记后的荧光染料牢固附着于目标生物分子上。其红色至近红外发射特性减少背景干扰，适合多通道荧光实验和深层组织成像。

总结而言，ATTO 680 NHS Ester通过NHS酯与伯胺的亲核取代反应实现荧光标记，形成稳定酰胺键。反应在弱碱性缓冲液中进行，无需催化剂，温和条件下保持生物分子活性。其化学反应特性结合红色荧光特性，使ATTO 680 NHS Ester成为蛋白质标记、分子探针构建及生物成像研究中重要的工具。

产品名称：ATTO 680 NHS Ester

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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