AF514 NHS Ester，AF 514琥珀酰亚胺酯，纯化与储存

AF514 NHS Ester（又称AF 514琥珀酰亚胺酯）是一种功能性荧光标记试剂，由Alexa Fluor 514荧光团与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活性酯结合而成。Alexa Fluor 514属于绿色荧光染料，激发峰约为514纳米，发射峰约为540纳米，具有高量子产率、亮度高、光稳定性良好的特点。该染料可用于蛋白质、多肽、抗体及其他含伯胺官能团的生物大分子的荧光标记。NHS酯末端为分子提供高选择性的化学活性，使其在温和条件下可与伯胺发生共价偶联反应，生成稳定的酰胺键。

AF514 NHS Ester分子结构包括三部分：荧光核心、羧基活化位点以及可能的亲水性取代基。荧光核心提供明亮的绿色信号，便于多通道成像实验；NHS酯作为活性位点，保证高选择性和高效率的共价连接；亲水取代基提高水溶性，减少非特异性吸附，使其在缓冲液和生物体系中使用更加稳定。

反应条件

1. 缓冲液体系
   AF514 NHS Ester的反应通常在中性或弱碱性缓冲液中进行，pH范围一般为7.0至8.5。此条件下，伯胺具有足够的亲核性，可以攻击NHS酯形成酰胺键，同时NHS酯在该pH范围内保持稳定，不易水解。常用缓冲液包括磷酸盐缓冲液（PBS）、碳酸盐缓冲液或HEPES缓冲液。避免使用强酸或强碱环境，因为会导致NHS酯水解或荧光团降解。

2. 溶剂选择
   反应可在水相体系或含少量极性有机溶剂（如DMSO、DMF）体系中进行，以溶解NHS酯或调节反应底物的溶解性。对于水溶性蛋白或生物分子，通常直接在缓冲液中溶解并反应；对于疏水底物或需要提高溶解性的情况，可加入少量DMSO或乙醇，但一般不超过10%体积，以避免蛋白质变性或荧光猝灭。

3. 温度控制
   反应温度通常在室温或低温（4至25摄氏度）进行。温和温度可确保蛋白质或生物分子的活性不受破坏，同时降低荧光团光漂白的风险。部分对温度敏感的生物分子可选择4摄氏度下反应，延长反应时间以确保偶联效率。

4. 反应时间
   NHS酯与伯胺的反应速率较快，一般在室温下反应1至2小时即可完成。对于低浓度蛋白质或较复杂体系，可适当延长反应时间至数小时，以提高标记效率。反应过程中应避光操作，以保护荧光团。

5. 摩尔比控制
   反应摩尔比的选择直接影响标记密度和生物分子功能保持。一般情况下，NHS酯略过量使用于蛋白质或抗体，以确保反应充分；对于敏感蛋白质，可控制摩尔比接近1:1，以避免多点偶联导致结构或功能损失。

6. 纯化与储存
   反应完成后，通常需要去除未反应的NHS酯和副产物，可通过透析、凝胶过滤或高效液相色谱（HPLC）纯化。纯化后的标记产物应在避光、低温条件下储存，以维持荧光性能和化学稳定性。储存缓冲液中可添加少量抗氧化剂或低浓度盐以增强稳定性。

产品名称：AF514 NHS Ester，AF 514琥珀酰亚胺酯

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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