streptavidin conjugate-AF350，Alexa Fluor 350 链霉亲和素的反应过程

Streptavidin conjugate-AF350 是一种将链霉亲和素（Streptavidin, SA）与 Alexa Fluor 350（AF350）荧光染料通过共价偶联形成的生物功能分子，其反应原理结合了蛋白质化学偶联反应的选择性与荧光染料的稳定光学特性。AF350 是一种蓝色荧光染料，激发波长约为 346 纳米，发射波长约为 442 纳米，具有良好的光稳定性和高量子产率。SA 是一种四聚体蛋白，每个亚基含有可与生物素高亲和力结合的位点（Kd ≈ 10^-15 M），其结构稳定、功能可靠。AF350 与 SA 的偶联反应主要基于氨基羧基化学反应原理，通过形成稳定的酰胺键将荧光染料固定在蛋白质表面。

反应的第一步是选择合适的活化形式的 AF350。通常，AF350 以 NHS 酯或异氰酸酯衍生物形式提供，这种活化形式能与蛋白质上的伯胺发生亲核加成反应。在该反应中，蛋白质赖氨酸侧链上的氨基作为亲核试剂攻击 AF350 的活化羧基碳原子，形成稳定的酰胺键，并释放 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）作为副产物。此反应是一种典型的亲核取代反应，选择性较高，且在温和缓冲条件下进行不会破坏蛋白质的天然构象。

反应的条件设计对偶联效率和蛋白质活性保持至关重要。偶联反应通常在弱碱性环境（pH 7.5–8.5）中进行，以保证赖氨酸氨基非质子化，提高亲核活性，同时避免 NHS 酯水解造成产率下降。溶剂选择上，多使用水溶性缓冲液（如 PBS 或 HEPES）与微量有机溶剂混合，以保证 AF350 的溶解性和蛋白质的稳定性。温和的室温条件可避免荧光漂白，同时维持 SA 四聚体的生物活性。

在反应过程中，摩尔比控制是关键。染料与蛋白质的摩尔比需适中，过量染料可能导致蛋白质构象改变或聚集，而不足则偶联效率低。通常通过逐步滴加或控制浓度实现最优标记度，使每个 SA 分子获得足够数量的荧光染料标记，同时保留其生物素结合能力。

偶联完成后，产物需要纯化以去除未反应的染料和副产物。常用方法包括凝胶过滤、透析或反相 HPLC 分离。凝胶过滤利用分子量差异，将 SA 复合物与小分子染料分离，透析可进一步去除残余低分子杂质，保证最终产物的水溶性和均一性。纯化过程中应避免光照，以防荧光漂白，同时保持温和条件保护蛋白质构象。

反应原理的另一个重要方面是偶联后的功能整合。AF350 通过共价酰胺键固定在 SA 表面，不影响四价生物素结合位点，从而实现双重功能：一方面提供高稳定性、可追踪的蓝色荧光信号，另一方面保留 SA 的高亲和生物素结合能力。该结合原理使 AF350-streptavidin conjugate 能够在生物体系中用于生物素化抗体、蛋白、多肽或纳米载体的标记和检测。

此外，反应原理还涉及染料与蛋白质相互作用的微观机制。AF350 的水溶性和磺酸盐基团保证偶联后不易自聚集，酰胺键的共价稳定性减少荧光信号衰减，同时蛋白质表面环境对染料的微极性环境也能增强荧光量子产率。这种协同作用保证了在细胞内或体外实验中，荧光信号稳定且可靠。

综上所述，streptavidin conjugate-AF350 的反应原理基于 AF350 的活化羧基与 SA 赖氨酸氨基的亲核加成形成酰胺键。反应条件温和，pH 弱碱性，溶剂体系兼顾水溶性和染料溶解性，摩尔比控制确保高标记度同时保留 SA 功能。偶联完成后，通过纯化和功能整合实现蓝色荧光信号与高亲和力生物素结合的双重特性，使其成为细胞成像、分子追踪及药物递送系统构建中可靠的荧光工具。

产品名称：Streptavidin conjugate-AF350

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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