Cyanine7-WGA,Cy7荧光染料标记小麦胚芽凝集素的偶联反应
Cyanine7-WGA 是一种将 Cyanine7(Cy7)荧光染料与小麦胚芽凝集素(Wheat Germ Agglutinin, WGA)通过共价偶联形成的生物功能分子。WGA 是一种糖结合蛋白,能够特异性识别 N-乙酰葡萄糖胺和唾液酸残基,而 Cy7 属于近红外荧光染料,激发波长约为 750 纳米,发射波长约为 770–780 纳米,具有高光稳定性、良好水溶性和低背景自发荧光的特点。通过偶联 Cy7 与 WGA,可在细胞及组织中实现糖基可视化、动态追踪及靶向标记,为细胞生物学、神经科学和药物递送研究提供实验工具。Cyanine7-WGA 的反应条件是实现高效偶联和保持蛋白质功能的关键因素。
Cyanine7-WGA 的偶联反应通常依赖于染料上的活化官能团与 WGA 蛋白的氨基或巯基发生化学反应。最常用的 Cy7 衍生物是 NHS 酯或活化羧基形式,通过与 WGA 赖氨酸侧链的 ε-氨基反应生成稳定的酰胺键。该亲核加成反应需要在温和条件下进行,以避免蛋白质构象改变或失活,同时保证偶联效率。反应体系通常选择水溶缓冲液,如 PBS 或 HEPES,pH 控制在 7.5–8.5,以确保赖氨酸氨基非质子化,提高亲核活性,同时减缓 NHS 酯水解。
温度控制也是反应条件的重要方面。Cyanine7-WGA 偶联反应一般在室温至 4 摄氏度范围内进行,以减少蛋白质变性和染料光漂白。高温条件可能导致 WGA 构象破坏或活性丧失,而低温条件可延长反应时间,提高产物稳定性。为了保证偶联反应均一性,通常使用轻柔搅拌或旋转混合,以保证染料和蛋白质充分接触。
反应摩尔比的调控对 Cyanine7-WGA 的标记度和功能保留至关重要。通常,染料与 WGA 的摩尔比在 2:1 至 10:1 之间,根据实验需要调整。过量染料可能导致蛋白质聚集或糖结合位点阻塞,而不足染料则偶联效率低、荧光信号弱。通过精确控制摩尔比,可在保证 WGA 糖结合功能的前提下实现高荧光标记。
反应时间也是关键因素。通常偶联反应在 1–4 小时范围内完成,视染料活化形式和 WGA 浓度而定。过长反应可能引起副反应或蛋白质降解,而过短反应可能导致标记不足。完成反应后,应及时通过凝胶过滤、透析或层析等方法去除未反应的染料和副产物,以获得纯净、均一的 Cyanine7-WGA 复合物。纯化过程应避光进行,以防染料光漂白,同时保持温和条件保护蛋白质功能。
缓冲液组成和离子强度对反应效果也有影响。通常选择无还原剂、低盐浓度的缓冲液进行反应,以避免 Cy7 的羧基或活化官能团与还原剂发生副反应。同时,缓冲体系应保证 WGA 的稳定性,防止蛋白质失活或聚集。反应结束后,可通过适当缓冲液储存 Cyanine7-WGA,使其在低温、避光条件下保持稳定荧光和糖结合活性。
综上所述,Cyanine7-WGA 的偶联反应条件包括:使用 Cy7 活化衍生物(如 NHS 酯)、在弱碱性缓冲液中进行亲核加成反应、温和温度控制(4–25 摄氏度)、适当摩尔比控制以平衡标记度与蛋白质活性、反应时间 1–4 小时,以及后续的纯化和储存处理。通过合理设计这些反应条件,可获得高效、稳定、功能完整的 Cyanine7-WGA,用于细胞糖基标记、膜结构追踪
产品名称:Cyanine7-WGA
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物

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齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务,如活性酯(NHS酯)、马来酰亚胺(MAL)、叠氮(N₃)、炔基(alkyne)等,便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合,实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外,齐岳生物还提供定制染料标记服务,包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物,满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。
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