Biotin-LOX，Biotin-乳酸氧化酶，生物素-乳酸氧化酶的合成路线

生物素-乳酸氧化酶（Biotin-LOX, Biotin-Lactate Oxidase）是一种通过化学偶联将生物素（Biotin）与乳酸氧化酶（LOX, Lactate Oxidase）蛋白结合形成的功能性酶标分子。乳酸氧化酶是一种黄素依赖的酶，能够催化乳酸氧化生成丙酮酸和过氧化氢，其蛋白质分子中包含多种可反应的氨基酸侧链，如赖氨酸ε-氨基、半胱氨酸巯基和羧基残基，可作为偶联位点。生物素分子具有高亲和力识别能力，能够与链霉亲和素或其衍生物结合，实现酶标定位和信号放大。Biotin-LOX将酶催化功能与生物素的识别能力整合，为生物分析、传感器构建及分子标记提供了有效工具。

Biotin-LOX的合成路线通常基于蛋白质氨基的酰化反应。生物素的羧基或活化衍生物（如NHS-Biotin, NHS-活化生物素）可与乳酸氧化酶表面赖氨酸的ε-氨基形成稳定酰胺键。其反应机理为典型的亲核加成-取代反应：赖氨酸氨基的孤电子对攻击生物素NHS酯的羰基碳原子，形成稳定酰胺键，同时释放NHS分子。该反应在温和缓冲体系（pH 7–8）中进行，可保持酶蛋白的活性和空间构象完整性。

具体的合成路线可概括为以下步骤：

1. 乳酸氧化酶制备：将纯化的乳酸氧化酶溶解在适宜缓冲液（如PBS, pH 7.4）中，确保蛋白质结构完整，氨基侧链可自由反应。

2. 生物素活化：使用NHS活化的生物素（NHS-Biotin）或通过EDC/NHS体系将生物素羧基活化形成NHS酯，使羧基碳呈电子缺陷，增强与氨基的亲核反应活性。

3. 偶联反应：将NHS-Biotin缓慢加入乳酸氧化酶溶液中，在轻柔搅拌条件下反应数小时至过夜。赖氨酸ε-氨基攻击NHS酯形成酰胺键，完成酶蛋白与生物素的共价偶联。

4. 反应终止及缓冲交换：偶联完成后，通过加入过量甘氨酸或Tris缓冲液终止反应，消耗未反应的活性NHS酯。同时进行缓冲交换或透析，以去除自由生物素和副产物。

5. 纯化：利用凝胶渗透色谱（GPC）、超滤或亲和层析（如链霉亲和素柱）分离纯化Biotin-LOX，确保产物的纯度和酶活性。

6. 产物表征：纯化后的Biotin-LOX可通过SDS-PAGE和Western Blot确认蛋白大小及偶联成功；荧光标记或链霉亲和素结合实验可验证生物素功能保留；酶动力学实验可评估乳酸氧化酶活性是否保持。

在整个合成过程中，反应条件需严格控制。温度过高或pH偏离中性可能导致酶失活；过量活化生物素可能引起多位点偶联，影响酶的构象和催化效率。因此，偶联比例、缓冲体系及反应时间是优化Biotin-LOX制备的关键参数。

总体而言，Biotin-LOX的合成路线基于生物素NHS酯与乳酸氧化酶赖氨酸ε-氨基的共价偶联，通过温和缓冲条件实现高效、特异的化学连接。该合成策略兼顾酶活性保持与生物素识别功能整合，为酶标传感器、分子探针及生物分析应用提供了可靠的化学途径。Biotin-LOX的合成路线清晰可控，能够保证产物的功能性和稳定性，适合用于体外实验和功能化生物材料构建。

产品名称：Biotin-LOX

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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