产品名称:AF488 Phalloidin,Alexa Fluor 488鬼笔环肽的分子结构与化学特性
1. 分子结构与化学特性
核心组分:
Alexa Fluor 488(AF488):绿色荧光染料,激发波长495 nm,发射波长519 nm,量子产率>0.92,光稳定性良好,pH耐受范围广(4-10),水溶性良好。
鬼笔环肽(Phalloidin):从毒蘑菇Amanita phalloides中提取的环状七肽,分子量1814.2 g/mol,通过吲哚-3-乙酸结构特异性结合F-actin的亚基间界面,抑制肌动蛋白解聚,稳定微丝结构。
连接方式:AF488的N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS ester)与Phalloidin的氨基(-NH₂)通过酰胺键共价偶联,形成“染料-肽”结构,确保标记稳定性。
物理性质:
深蓝色固体粉末,易溶于甲醇、DMSO,微溶于水;需-20℃避光干燥保存,避免光解与湿气降解。
分子量约2300-2500 g/mol(含染料与连接臂),纯度≥95%(HPLC验证)。
2. 合成路径与关键技术
合成策略:
Phalloidin提取与纯化:从毒蘑菇中通过酸水解、色谱分离(如HPLC)获得高纯度Phalloidin,需去除毒素杂质(如α-amanitin)。
AF488活化:Alexa Fluor 488羧基经EDC/NHS活化生成NHS酯,在弱碱性条件(pH 8.0-8.5)下与Phalloidin的氨基反应,形成稳定酰胺键。
纯化验证:通过透析或凝胶过滤去除未反应染料,HPLC/质谱确认偶联效率(通常>90%),动态光散射(DLS)验证标记后复合物粒径(约1-2 nm)。
3. 生物活性与作用机制
肌动蛋白标记原理:
Phalloidin特异性结合F-actin的亚基间界面,稳定微丝结构,防止解聚;AF488提供荧光信号,通过共聚焦显微镜或荧光显微镜实现高分辨率成像。
响应特性:毫秒级快速结合动力学,支持动态过程追踪(如细胞迁移、胞吞作用、神经突触形成)。
应用场景:
细胞骨架研究:观察微丝网络分布、细胞形态变化、细胞分裂(如有丝分裂、胞质分裂)、细胞极性建立。
神经科学:研究神经元生长锥动态、突触可塑性、轴突导向及神经退行性疾病中的肌动蛋白异常。
病理学:肿瘤细胞侵袭转移机制、免疫细胞活化(如巨噬细胞伪足形成)、血管生成过程分析。
药物筛选:评估肌动蛋白聚合抑制剂(如细胞松弛素)或稳定剂(如Jasplakinolide)的活性,辅助抗肿瘤药物开发。

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