5-CFDA-SE，5-羧基二乙酰化荧光素琥珀酰亚胺酯，反应步骤

5-羧基二乙酰化荧光素琥珀酰亚胺酯（5-Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester，5-CFDA-SE）是一种功能化荧光前体分子，结合了二乙酸酯保护的羟基和琥珀酰亚胺酯（NHS）活性端。分子在未水解状态下低荧光性，适合穿透细胞膜或与生物大分子反应。进入细胞或缓冲体系后，二乙酸酯基被酯酶水解，释放出带羧基的荧光素，而琥珀酰亚胺酯端可与氨基或其他亲核官能团形成稳定的共价连接，实现荧光标记和功能化。该分子广泛用于细胞成像、蛋白质标记、载体修饰及分子示踪实验。

2. 化学结构特点
5-CFDA-SE分子主要包含三个功能部分：

1. 荧光素骨架：提供稳定共轭体系，实现绿色荧光发射（激发约490 nm，发射约520 nm），量子产率高。

2. 二乙酸酯保护基：修饰荧光素羟基，屏蔽负电荷，提高分子脂溶性，便于细胞膜穿透。

3. 琥珀酰亚胺酯（NHS）端：作为活性位点，可与蛋白质、肽链或其他含氨基的分子形成酰胺键，实现共价标记。

3. 反应步骤
5-CFDA-SE的制备和应用主要包括以下步骤：

（1）荧光素羟基乙酰化

1. 荧光素分子中的羟基在有机溶剂中与乙酸酐或乙酸乙酯反应。

2. 在催化剂或碱性条件下，羟基与乙酸酐发生酯化，形成二乙酰化产物，屏蔽羟基负电荷。

3. 反应生成的二乙酰化荧光素可通过柱层析或重结晶纯化，获得高纯度中间体。

（2）羧基活化形成NHS酯

1. 二乙酰化荧光素的5-羧基在有机溶剂中加入N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）和碳二亚胺类活化剂（如DCC或EDC）。

2. 羧基在活化剂作用下形成O-酰化中间体，随后与NHS结合生成琥珀酰亚胺酯。

3. 生成的5-CFDA-SE通过柱层析或重结晶进行纯化，获得稳定的活性化合物。

（3）标记与应用

1. 将5-CFDA-SE溶解于干燥有机溶剂（如DMSO或DMF）中，与目标分子（含氨基的蛋白质或载体）反应。

2. NHS端的羰基碳被目标分子的氨基亲核进攻，形成稳定的酰胺键，实现共价标记。

3. 若应用于细胞内示踪，分子进入细胞后，酯酶水解二乙酰基，释放带羧基的荧光素，形成绿色荧光信号，可通过显微镜或流式细胞术检测。

4. 反应注意事项

• 制备和使用过程中需避免水分，以防NHS端水解。

• 酯化和NHS活化步骤需控制温度和pH，以保证产物纯度和活性。

• 储存应低温避光，以保持荧光性能和化学稳定性。

产品名称：5-羧基二乙酰化荧光素琥珀酰亚胺酯

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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