产品名称：Alexa Fluor 647蛋白标记试剂盒，AF647蛋白标记试剂盒

Alexa Fluor 647（简称 AF647）蛋白标记试剂盒是一款针对远红外荧光通道设计的高效蛋白标记试剂，由 Thermo Fisher Scientific 等厂商研发生产，凭借其优异的光学性能、高标记效率及良好的生物相容性，广泛应用于生命科学领域的多色荧光成像、流式细胞术、蛋白相互作用研究等实验，是远红外荧光标记领域的主流试剂之一。

从核心组成与性能来看，试剂盒包含六大关键组分：AF647 活性酯（主要为 NHS 酯，部分试剂盒提供马来酰亚胺活性酯，满足不同标记需求）、反应缓冲液（多为 0.1mol/L 硼酸盐缓冲液，pH 8.5，为活性酯与蛋白基团的反应提供适宜环境）、淬灭剂（通常为 1mol/L 甘氨酸溶液，用于终止标记反应，中和过量活性酯）、纯化树脂（填充 Sephadex G-25 或 G-50 凝胶，用于去除未结合的游离染料）、蛋白定量试剂（如 BCA 试剂盒，用于检测标记后蛋白浓度）以及详细说明书（包含试剂配方、操作步骤、 troubleshooting 指南）。其中，AF647 荧光染料属于菁类衍生物，其光学性能经过深度优化：激发波长为 650nm，发射波长为 665nm，处于远红外光区域，该区域的背景荧光（如细胞自发荧光、组织 autofluorescence）极低，可显著提升成像信噪比；同时，该染料具有极高的光稳定性（相较于传统远红外染料 Cy5，光漂白速率降低约 40%）、高量子产率（量子产率约 0.33）、宽 pH 耐受性（在 pH 3-11 范围内，荧光强度波动小于 8%）以及良好的水溶性（通过磺酸基修饰，降低染料聚集性），即使在高浓度标记下，也不易形成染料二聚体，确保荧光信号的稳定性与均一性。

在标记原理与流程上，该试剂盒基于特异性共价结合反应实现蛋白标记：对于 NHS 酯活性染料，其可与蛋白分子表面赖氨酸残基的 ε- 氨基（-NH2）在弱碱性条件下（pH 7.5-9.0）发生亲核取代反应，形成稳定的酰胺键；对于马来酰亚胺活性染料，则针对蛋白表面半胱氨酸残基的巯基（-SH）反应，形成硫醚键，两种反应均具有高特异性，且反应效率高（反应转化率可达 80% 以上），不会破坏蛋白的空间结构与生物活性（如抗体的抗原结合能力、酶的催化活性）。标记流程分为五步：第一步为蛋白准备，将目标蛋白（如抗体、酶、细胞因子）浓度调整至 0.5-10mg/mL，若蛋白中含有游离巯基，需先用还原剂（如 DTT）处理，再通过脱盐柱去除还原剂；第二步为反应体系配置，按照染料与蛋白 1:10-1:30 的摩尔比加入 AF647 活性酯，轻轻混匀后，在室温下避光反应 1 小时；第三步为淬灭反应，加入 5μL 淬灭剂，室温反应 15 分钟，终止未反应的活性酯；第四步为纯化除杂，将反应液上样至预处理好的纯化柱，通过重力洗脱收集标记蛋白，弃去最先流出的穿透液（含游离染料）；第五步为质量检测，通过紫外分光光度计测定 280nm（蛋白吸收峰）与 650nm（AF647 吸收峰）的吸光度，计算标记效率（通常为 2-8 个染料分子 / 蛋白），同时用蛋白定量试剂检测标记后蛋白浓度，确保满足实验需求。

在应用场景中，AF647 蛋白标记试剂盒的适用范围极为广泛：在多色荧光成像实验中，AF647 的远红外荧光信号可与其他荧光染料（如激发波长 488nm 的 FITC、555nm 的 Cy3）形成清晰的光谱区分，避免荧光串扰，适用于细胞内多靶点共定位研究（如同时观察细胞膜蛋白、细胞骨架与细胞核的分布）；在流式细胞术实验中，标记抗体后可用于检测低表达水平的细胞表面标志物（如干细胞表面标志物 CD133），由于远红外通道背景信号低，可显著提升检测灵敏度，区分弱阳性细胞群体；在蛋白印迹（Western Blot）实验中，标记二抗后可通过荧光成像检测目标蛋白，相较于传统化学发光法，具有线性范围宽、结果可重复、可定量分析等优势；在活体成像实验中，AF647 的远红外光穿透力强（可穿透约 1-2cm 的组织），能有效减少组织对光的吸收与散射，适用于小动物体内肿瘤靶向成像、血管成像等研究；此外，该试剂盒还可用于荧光共振能量转移（FRET）实验，作为能量受体，与能量供体（如 AF555）搭配，研究蛋白分子间的相互作用（如受体与配体的结合）。

在使用注意事项上，AF647 活性酯对水分敏感，需在 - 20℃避光密封储存，且开封后需尽快使用，避免受潮失效；标记反应需严格控制 pH 值，若 pH 过低（<7.0），会导致活性酯水解速率加快，降低标记效率；纯化过程中，需确保纯化柱充分平衡，避免洗脱液 pH 波动影响蛋白稳定性；标记后的蛋白需在 4℃避光储存，短期使用（1 周内）可保存于 PBS 缓冲液中，长期储存需加入甘油（终浓度 50%）并置于 - 20℃，避免反复冻融；此外，由于 AF647 的激发光为远红外光，实验中需使用配套的光学滤光片（激发滤光片 640/30nm，发射滤光片 670/30nm），确保荧光信号的有效采集。

产地：西安

规格：50mg 100mg 500mg

纯度：95%

状态：固体/粉末

储藏条件：冷藏

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！

西安齐岳生物科技有限公司是一家集研发，生产，销售为一体的高科技企业，可提供合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、顺磁/超顺磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、近红外荧光染料、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、点击化学产品、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯等等，可以满足不同客户的定制需求。

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小编：HLL 2025年11月25日