产品名称：CF 568 CTB，CF568标记的重组霍乱毒素 B 亚单位

CF568 标记的重组霍乱毒素 B 亚单位（简称 CF568 CTB）是一款将 CF568 荧光染料与重组霍乱毒素 B 亚单位（CTB）通过共价键结合形成的荧光探针，兼具 CTB 的生物靶向功能与 CF568 的荧光成像特性，在细胞生物学、神经生物学、微生物学领域，主要用于细胞膜糖脂（尤其是 GM1 神经节苷脂）的定位、细胞转运机制研究及细菌毒素作用机制分析，是一款功能独特且应用广泛的生物荧光工具。

从核心成分特性来看，重组霍乱毒素 B 亚单位（CTB）是霍乱弧菌产生的霍乱毒素（CT）的非毒性亚单位，分子质量约为 55kDa，由五个相同的单体组成五聚体结构，每个单体都含有一个 GM1 神经节苷脂特异性结合位点。GM1 神经节苷脂是一种广泛存在于真核细胞表面的糖脂，尤其在神经细胞、上皮细胞表面高表达，其糖链结构为 CTB 提供了特异性结合位点，CTB 与 GM1 的结合亲和力极高（KD 值约为 10-10mol/L），且结合后不会引起细胞毒性（CT 的毒性由 A 亚单位引起，重组 CTB 不含 A 亚单位），因此成为研究 GM1 分布及细胞内转运的理想靶向分子。而 CF568 荧光染料属于罗丹明类衍生物，其光学性能经过优化：激发波长为 570nm，发射波长为 590nm，发出明亮的橙色荧光，具有光稳定性强（光漂白速率低于传统罗丹明染料约 25%）、荧光量子产率高（约 0.60）、水溶性好（通过磺酸基修饰，在水中溶解度可达 5mg/mL 以上）及 pH 耐受性宽（pH 4-10 范围内荧光强度稳定）等优势，可清晰显示 CTB 在细胞内的定位与动态变化，且不易受细胞自发荧光干扰。

在制备工艺上，CF568 CTB 的制备分为两大步骤：重组 CTB 的表达纯化与 CF568 的荧光标记。第一步为重组 CTB 的表达纯化，采用大肠杆菌表达系统（如 BL21 菌株），将 CTB 基因克隆至表达载体（如 pET-28a）中，通过 IPTG 诱导表达重组 CTB；表达后的菌体经超声破碎、离心收集上清液，再通过亲和层析（如 Ni-NTA 层析柱，针对带组氨酸标签的重组 CTB）或凝胶过滤层析（如 Sephadex G-75 柱）纯化，获得高纯度（SDS-PAGE 纯度≥95%）的重组 CTB 五聚体，纯化过程中需严格控制缓冲液 pH（通常为 pH 7.4 的 PBS 缓冲液）与温度（4℃），避免 CTB 五聚体解聚为单体，失去 GM1 结合活性。第二步为 CF568 荧光标记，选择 CF568 的 NHS 酯衍生物（CF568-NHS ester）作为标记试剂，其可与 CTB 表面赖氨酸残基上的氨基（-NH2）在中性条件下（pH 7.5-8.0）发生酰胺化反应，形成稳定的共价键。标记过程中，需严格控制染料与 CTB 的摩尔比（通常为 10:1-15:1），避免过量染料导致 CTB 的 GM1 结合位点被占据，影响靶向性；反应在室温下避光进行 30-60 分钟后，加入甘氨酸淬灭过量活性酯，再通过凝胶过滤层析（Sephadex G-25 柱）去除未结合的游离 CF568 染料，获得 CF568 CTB。标记后的产物需通过紫外分光光度计检测 280nm（CTB 吸收峰）与 570nm（CF568 吸收峰）的吸光度，计算标记效率（通常为每个 CTB 五聚体结合 5-10 个 CF568 分子），同时通过 ELISA 实验验证 CTB 的 GM1 结合活性，确保标记后 CTB 仍能特异性结合 GM1。

在应用场景中，CF568 CTB 的用途极为广泛，主要集中在四大领域：一是细胞膜 GM1 神经节苷脂定位研究，在细胞生物学实验中，将 CF568 CTB 与细胞共孵育后，可通过荧光显微镜观察 GM1 在细胞表面的分布情况，如研究正常细胞与肿瘤细胞表面 GM1 表达水平的差异，或分析细胞分化过程中 GM1 的动态变化；在皮肤生物学研究中，可用于观察角质形成细胞表面 GM1 的分布，探讨其在皮肤屏障功能中的作用。二是细胞内转运机制研究，CTB 与 GM1 结合后，会通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞，随后经历早期内体、晚期内体、高尔基体等细胞器的转运过程，CF568 CTB 可作为追踪探针，实时观察这一转运路径，分析细胞内囊泡运输机制，或研究药物、毒素对细胞内转运过程的影响（如某些病毒通过劫持 CTB 的转运路径进入细胞，CF568 CTB 可辅助研究病毒感染机制）。三是神经生物学研究，神经细胞表面富含 GM1 神经节苷脂，CF568 CTB 可用于标记神经细胞膜，观察神经元的形态（如树突、轴突的分布），或追踪神经递质受体在细胞膜上的动态变化；在神经退行性疾病（如阿尔茨海默病）研究中，可用于分析病变脑组织中 GM1 的表达变化，探讨 GM1 与疾病发生的关联。四是细菌毒素作用机制研究，除霍乱毒素外，其他细菌毒素（如大肠杆菌不耐热肠毒素 LT）也可与 GM1 结合，CF568 CTB 可作为竞争抑制剂，与这些毒素竞争结合 GM1，辅助研究毒素与宿主细胞的相互作用，或筛选针对毒素的中和抗体。

在使用注意事项上，CF568 CTB 需在 4℃避光密封储存，避免反复冻融导致 CTB 五聚体解聚或 CF568 荧光猝灭；使用前需用 PBS 缓冲液稀释至适宜浓度（通常为 1-10μg/mL），稀释时需轻轻混匀，避免剧烈振荡；与细胞共孵育时，孵育时间通常为 15-60 分钟，孵育温度为 37℃（模拟生理条件，促进 CTB 与 GM1 的结合及内吞），孵育后需用 PBS 洗涤 3 次，去除未结合的 CF568 CTB，减少背景荧光；由于 GM1 在不同细胞中的表达水平差异较大，需根据细胞类型调整 CF568 CTB 的浓度与孵育时间，通过预实验确定最佳实验条件；此外，部分细胞表面可能存在非特异性结合位点，实验中可设置竞争对照组（加入过量未标记 CTB，阻断特异性结合），确保实验结果的特异性；对于用于活体实验的 CF568 CTB，需选择无内毒素的产品（通过鲎试剂检测内毒素含量 < 0.1EU/μg），避免内毒素引起的炎症反应影响实验结果。

产地：西安

规格：50mg 100mg 500mg

纯度：95%

状态：固体/粉末

储藏条件：冷藏

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！

西安齐岳生物科技有限公司是一家集研发，生产，销售为一体的高科技企业，可提供合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、顺磁/超顺磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、近红外荧光染料、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、点击化学产品、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯等等，可以满足不同客户的定制需求。

更多推荐：

Oregon Green488蛋白标记试剂盒

2183440-37-9，TCO-PEG9-maleimide，反式环辛烯-九聚乙二醇-马来酰亚胺

1845691-47-5，6-FAM-OtBu，6-羧基荧光素叔丁酯

1215204-46-8，N-ε-propargyloxycarbonyl-L-lysine，N-ε- 炔丙氧基羰基-L-赖氨酸

小编：HLL 2025年11月25日