产品名称：Alexa Fluor 568 蛋白标记试剂盒的核心组成与反应机制

1. 核心组成与反应机制

活性成分：以AF568 NHS酯（琥珀酰亚胺酯）为核心，分子量约791.80，溶于DMSO，需-20°C避光保存。NHS酯在中性/弱碱性条件（pH 8.3）下与蛋白质伯胺（如赖氨酸侧链）共价结合，形成稳定酰胺键。

配套组件：包含碳酸氢钠缓冲液（调节pH至8.3）、纯化柱（如超滤管或树脂柱）、洗脱缓冲液、封闭试剂（如Tris缓冲液）及收集管。部分试剂盒含BSA去除模块，避免非特异性结合。

标记比例：推荐染料与蛋白（如150kDa IgG）摩尔比为10:1，确保高效偶联且DOS（染料/蛋白比）在适宜范围（通常通过吸收光谱计算，如A572/A280校正值）。

2. 操作流程与关键步骤

样品准备：蛋白需稀释至2 mg/mL，溶于不含胺基的缓冲液（如PBS），避免Tris、甘氨酸等干扰。若蛋白含稳定剂（如BSA），需提前纯化。

标记反应：将蛋白溶液与染料混合，室温搅拌30-60分钟。加入碳酸氢钠调节pH至7.5-8.5，激活氨基反应活性。可选步骤：反应后加入1M Tris（pH 8.7）封闭未反应的NHS酯，减少非特异性结合。

纯化与回收：通过超滤（如12000×g离心）或层析柱去除游离染料。纯化后蛋白可加入BSA（0.1%）或甘油（等体积），2-8°C避光保存半年，或-20°C长期储存。

质量控制：通过吸收光谱测定A280（蛋白）与A572（染料），结合摩尔消光系数计算DOS，确保标记效率。

3. 核心应用场景

成像技术：适用于共聚焦显微镜、流式细胞术（激发576nm/发射603nm）、荧光显微镜等，兼容罗丹明红滤光片通道。例如，标记抗体用于免疫荧光染色，或标记细胞骨架蛋白（如F-actin）观察亚细胞结构。

功能研究：用于蛋白质相互作用分析（如免疫共沉淀、pull-down实验）、细胞表面受体定位、胞内信号通路追踪（如钙离子动态）。

多重标记：可与绿色/蓝色荧光染料（如AF488、AF350）联用，实现多靶点同步检测，如共定位研究或蛋白复合物分析。

特殊应用：结合WGA（小麦胚芽凝集素）标记糖蛋白，或用于活细胞追踪（如显微注射标记多糖/糖蛋白）。

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