产品名称：79955-27-4，5-Carboxyfluorescein diacetate，5-CFDA，5-羧基荧光素二乙酸酯

基本信息

该试剂是一种常用的荧光探针前体，由 5 - 羧基荧光素（5-FAM）与二乙酸酯基团结合而成。外观为淡黄色至黄色结晶性粉末，难溶于水，易溶于 DMSO、乙醇、丙酮等有机溶剂。化学性质独特，二乙酸酯基团可保护荧光素的羧基和酚羟基，使其在细胞外不发光；进入细胞后，二乙酸酯基团被细胞内的酯酶水解，释放出具有荧光活性的 5 - 羧基荧光素。需避光、密封置于 - 20℃储存，避免高温和潮湿导致水解。

核心特性与优势

5-CFDA 的核心优势在于其 “激活型” 荧光特性，作为前体分子时荧光量子产率极低，进入细胞后经酯酶水解激活，荧光强度可提升数十倍，背景荧光干扰极小。激活后的 5 - 羧基荧光素激发波长约为 492nm，发射波长约为 517nm，属于绿色荧光波段，发光强度强，检测灵敏度高。该试剂的细胞穿透性良好，可通过被动扩散进入细胞，对细胞毒性低，适用于活细胞的长期培养和动态监测。此外，其荧光性能对 pH 值变化较敏感，可作为细胞内 pH 探针使用。

作用机制与检测原理

5-CFDA 本身无荧光活性，因其分子中的二乙酸酯基团封闭了荧光素的发光位点。当试剂进入活细胞后，细胞内的非特异性酯酶会催化二乙酸酯基团水解，去除保护基团，释放出游离的 5 - 羧基荧光素。5 - 羧基荧光素具有强荧光活性，且不易穿透细胞膜，会在细胞内累积，通过荧光显微镜或流式细胞仪可检测到荧光信号，信号强度与细胞内酯酶活性、细胞存活状态相关。此外，5 - 羧基荧光素的荧光强度随 pH 值升高而增强，可用于定量检测细胞内 pH 变化。

应用场景

广泛应用于细胞生物学研究，包括细胞活力检测、细胞增殖分析、细胞凋亡监测和细胞内 pH 测定。在细胞活力检测中，只有活细胞能水解 5-CFDA 产生荧光，死细胞无酯酶活性，可通过荧光强度判断细胞存活比例；在细胞增殖研究中，可追踪细胞分裂过程中荧光的分布与稀释，分析增殖速率；在药物筛选中，可用于评估药物对细胞活力的影响，筛选具有细胞毒性或增殖抑制作用的化合物；在细胞生理学研究中，可作为 pH 探针，监测细胞内酸碱平衡变化与生理功能的关系。此外，还可用于微生物计数、细胞迁移实验等。

使用注意事项

使用时需用无水有机溶剂制备储备液（10-50mM），避免直接溶于水导致水解。工作浓度通常为 0.1-10μM，需用细胞培养液稀释，避免有机溶剂浓度过高损伤细胞。染色时需在 37℃、5% CO2 培养箱中孵育 15-30 分钟，孵育后需用 PBS 缓冲液洗涤细胞，去除未进入细胞的游离试剂，降低背景荧光。操作过程中需全程避光，避免荧光素被光漂白。储存时需密封置于 - 20℃冰箱，配合干燥剂使用，保质期约 18-24 个月。该试剂对酯酶敏感，避免与酯酶抑制剂同时使用，否则会影响检测结果。

产地：西安

规格：50mg 100mg 500mg

纯度：95%

状态：固体/粉末

储藏条件：冷藏

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！

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小编：HLL 2025年11月25日