AF633 C5 Maleimide，AF633 C5 马来酰亚胺的反应步骤

AF633 C5 马来酰亚胺结构中含有一个马来酰亚胺官能团和一个 C5 碳链连接臂。马来酰亚胺可选择性地与自由巯基（-SH）反应，例如蛋白质或多肽中的半胱氨酸残基。在略偏碱性条件下（通常 pH 6.5–7.5），巯基以硫负离子形式存在，对马来酰亚胺的 α,β-不饱和酮发起亲核攻击，形成稳定的硫醚键，实现染料与靶分子的共价结合。C5 碳链提供了一定的空间灵活性，使染料结合后不易干扰蛋白质构象或活性位点。

典型的反应步骤如下：

1. 溶液准备：将 AF633 C5 马来酰亚胺储备液溶解于干燥 DMSO 或 DMF 中，一般浓度为 1–5 mM，避光保存。储备液应避免水分，以防水解导致活性降低。

2. 蛋白质或多肽准备：待标记的蛋白或多肽溶解在缓冲液中，缓冲液应不含巯基干扰物（如 DTT、β-巯基乙醇等），常用 PBS、Hepes 或碳酸盐缓冲液，pH 控制在 6.5–7.5。蛋白浓度一般在 1–10 mg/mL。

3. 反应混合：将储备液稀释至适当工作浓度，与蛋白溶液按摩尔比加入，常用摩尔比范围为 1:1 至 5:1（染料:蛋白）。混合后轻轻颠倒或旋转混匀，避免剧烈振荡以减少蛋白变性。

4. 反应条件：在室温或 4℃ 下避光孵育 30–120 分钟。反应时间根据蛋白巯基数量和反应效率调整，确保尽量充分标记而不过度修饰。

5. 终止反应：反应结束后，可通过加入低浓度巯基化合物（如 L-半胱氨酸或谷胱甘肽）或直接进行纯化来终止未反应的染料。

6. 产物纯化：常用方法包括透析、凝胶过滤（如 Sephadex G-25）或离心滤器去除游离染料。纯化后可获得稳定、均一的 AF633 标记蛋白或多肽。

AF633 C5 马来酰亚胺标记后的蛋白在光学上表现为远红荧光，激发波长约 630 nm，发射波长约 650–670 nm，远红光区特性降低了细胞自体荧光干扰，适合多通道荧光成像。由于马来酰亚胺对巯基高度选择性，标记反应不会显著干扰蛋白的其他功能基团。C5 碳链长度适中，可减少荧光染料与蛋白表面或活性位点的直接接触，从而保持蛋白构象稳定。

使用时应注意以下事项：避免强光直射，储备液应低温避光保存，操作中避免含巯基还原剂和高浓盐环境。标记后的产物应尽快用于实验或低温保存，以维持荧光强度和生物活性。AF633 C5 马来酰亚胺可广泛应用于蛋白标记、免疫检测、细胞成像和生物分子追踪等实验，为多色荧光成像提供稳定、可控的远红荧光信号。

产品名称：AF633 C5 马来酰亚胺

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.09