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Alexa Fluor 700 标记小麦胚芽凝集素的生物学应用
发布时间:2025-11-27     作者:wyh   分享到:

产品名称:Alexa Fluor 700 标记小麦胚芽凝集素的生物学应用

1. 结构与原理

WGA(小麦胚芽凝集素):源自小麦胚芽的植物凝集素,分子量约36 kDa,由两个相同亚基组成。特异性结合N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和唾液酸残基,广泛存在于细胞膜糖蛋白、糖脂及细菌细胞壁(如革兰氏阳性菌肽聚糖)中。

Alexa Fluor 700:近红外荧光染料(激发波长696-702 nm,发射波长719-723 nm),斯托克斯位移约21 nm,光稳定性高、自发荧光低,适合深层组织成像及多色实验。

复合物特性:通过共价键(如NHS酯与赖氨酸氨基结合)偶联,水溶性良好,分子量约增加1177-1300 Da,对WGA的糖结合活性无显著影响。

2. 生物学应用

核心用途:

细胞膜标记:活细胞或固定细胞的质膜可视化,监测细胞形态、迁移、伪足形成等动态过程。

糖基化研究:分析细胞表面糖链模式,研究糖类介导的细胞间相互作用(如肿瘤细胞识别、免疫细胞黏附)。

神经示踪:作为逆行/顺行神经元示踪剂,穿透突触屏障,追踪神经元连接。

微生物标记:特异性结合革兰氏阳性菌细胞壁,用于细菌感染研究。

多色成像:与FITC、TRITC、DAPI等联用,实现多通道荧光成像(如流式细胞术、共聚焦显微镜)。

实验场景:

固定细胞/组织切片(需甲醛或多聚甲醛固定,避免甲醇破坏糖结构)。

活细胞培养物、无细胞体系(如纯化的糖蛋白)。

活体成像(近红外穿透力强,减少自发荧光干扰)。

3. 实验操作要点

储存与配制:

固体/粉末:-20℃避光冷冻保存,避免反复冻融;工作液浓度通常为5-10 μg/mL,需用PBS或生理盐水稀释,可加入1% BSA减少非特异性结合。

溶液:分装后-20℃保存,有效期1-2年(具体参考产品说明书)。

染色步骤(典型流程):

细胞固定:4%多聚甲醛室温10-15分钟。

透化处理:0.5% Triton X-100透化5分钟(活细胞可省略)。

AF 700 WGA孵育:37℃避光孵育15-30分钟(浓度5-10 μg/mL,需优化)。

洗涤:PBS清洗3次,封片(抗荧光淬灭剂+DAPI复染细胞核)。

注意事项:

操作需避光,戴手套、穿实验服;WGA有毒,避免直接接触。

避免甲醇固定剂,防止糖蛋白结构破坏。

工作液现配现用,避免反复冻融;需设置未标记WGA作为阴性对照。

Alexa Fluor 700 标记小麦胚芽凝集素

关于我们:

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