产品名称：Biotin 蛋白标记试剂盒的核心组成与原理

核心组成与原理

组成：试剂盒通常包含生物素衍生物（如NHS-生物素、Biotin-PEG4-NHS、Biotin-LC-NHS等）、标记缓冲液（pH 7.2-8.5的碳酸盐/磷酸盐缓冲液）、超滤管/脱盐柱、纯化试剂（如葡聚糖凝胶）、保护剂（BSA、NaN₃）及对照样品。例如，NHS-生物素通过与蛋白质赖氨酸残基或N端的氨基共价结合，形成稳定的酰胺键。

原理：基于生物素与亲和素（Avidin）或链霉亲和素（Streptavidin）的高亲和力结合（解离常数Kd≈10⁻¹⁵ M），实现信号放大或目标蛋白的捕获。生物素标记后，可与荧光探针、酶（如HRP）或磁珠偶联，用于检测、纯化或成像。

应用场景

免疫检测：ELISA、流式细胞术、免疫荧光（IF）中标记抗体/抗原，检测细胞表面蛋白（如CD系列）、细胞因子或病原体。

蛋白质纯化：通过链霉亲和素磁珠/树脂富集生物素化蛋白，用于Western blot、质谱分析或功能研究。

细胞成像：标记细胞膜蛋白（如受体、黏附分子）或细胞内蛋白（如转录因子），结合共聚焦显微镜观察动态过程。

代谢研究：追踪生物素化代谢产物（如脂肪酸、胆固醇）的分布与代谢途径。

多色联用：与FITC、Cy系列染料或量子点联用，实现多参数分析（如细胞凋亡、信号通路激活）。

操作流程与注意事项

蛋白准备：

调整蛋白浓度至1-2 mg/mL（如抗体需超滤浓缩），避免游离氨基（如Tris、甘氨酸）干扰。

使用超滤管（截留分子量5-50 kDa）脱盐，去除BSA、NaN₃等杂质。

标记反应：

按比例加入生物素试剂（如NHS-PEG4-Biotin），室温/37℃避光反应30分钟至2小时。

生物素与蛋白摩尔比通常为5-20:1（如1 mg IgG需26 μL 10 mM NHS-PEG4-Biotin）。

纯化与保存：

通过凝胶过滤（如Sephadex G-25）或超滤去除游离生物素。

加入保护剂（0.1% BSA、NaN₃），分装后-20℃避光保存，避免反复冻融。

注意事项：

操作需避光、低温；避免使用含巯基/叠氮的试剂；设置未标记对照。

标记效率可通过HABA法检测（利用生物素竞争HABA-亲和素结合，通过500 nm吸光度变化计算摩尔比）。

关于我们：

西安齐岳生物科技有限公司经营的产品种类包括有：近红外荧光染料、点击化学产品、合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯，二氧化硅及介孔二影产品，荧光蛋白及荧光探针等，欢迎咨询。

我们能提供的产品：

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