Difluorocarboxyfluorescein NHS Ester, 5-isomer，合成步骤概述

Difluorocarboxyfluorescein NHS Ester, 5-isomer的中文名称可表述为“5-异构体二氟羧基荧光素N-羟基琥珀酰亚胺酯”，其中“Difluorocarboxyfluorescein”表示荧光素染料分子上引入了两个氟原子并在分子结构中保留羧基，赋予其光学性质稳定且具有远红光或绿色发射特性；“NHS Ester”表示羧基末端通过活化为N-羟基琥珀酰亚胺酯，使其能够在温和条件下与氨基官能团形成稳定的酰胺键，实现高效共价偶联。5-isomer表示羧基位于染料分子特定位置，是保证标记特异性和反应性的重要结构特征。

该化合物的合成步骤通常包括三个核心环节：荧光素骨架的制备、羧基功能化及NHS酯活化。在荧光素骨架制备阶段，首先通过芳香族缩合反应或重排反应构建二氟荧光素核心结构，同时在特定位置保留羧基以便后续活化。该过程通常在有机溶剂体系中进行，如二氯甲烷、乙腈或DMF，并辅以适当的酸或碱催化剂控制环化和取代反应的 regioselectivity，确保羧基位于5号位置，形成5-异构体。

羧基功能化步骤旨在为荧光素提供可反应末端。通过在苯环或羟基邻位引入羧基，并在适当条件下保护其他活性位点，可避免非特异性反应和副产物形成。该过程通常涉及酸性或碱性条件调节，以及适量氧化或酰化试剂的使用，以保证羧基官能团的完整性和纯度。通过薄层色谱（TLC）或液相色谱监控反应进程，可确保产物选择性高、结构完整。

NHS酯活化是最终关键步骤。利用羧基与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）和碳二亚胺类活化剂（如EDC或DCC）反应，将羧基转化为NHS酯。该反应在无水溶剂（如DMF、DMSO）或低水含量缓冲液中进行，以避免NHS酯水解。反应通常在室温或轻微加热条件下完成，反应时间根据羧基活性和体系浓度控制，从数小时到十几小时不等。反应完成后，通过沉淀、柱层析或透析等方法去除未反应的NHS、EDC或副产物，得到纯化的Difluorocarboxyfluorescein NHS Ester 5-异构体。

整个合成过程的核心在于控制羧基位置、保证NHS活化效率及染料光学性能。5-异构体的定位决定了其与氨基官能团偶联时的空间构型与反应效率，而二氟修饰可提高染料稳定性和光学性能，使其适合蛋白质、肽链、多肽或纳米材料标记。PEG或其他柔性连接链可在后续偶联中进一步改善溶解性和分散性。

总体而言，5-异构体二氟羧基荧光素N-羟基琥珀酰亚胺酯（Difluorocarboxyfluorescein NHS Ester, 5-isomer）的合成包括荧光素骨架构建、羧基功能化以及NHS酯活化三个步骤。每一步均需控制反应条件、位点选择性和化学纯度，以获得高活性、稳定的荧光染料产物。该分子广泛用于蛋白质标记、荧光探针构建及纳米材料功能化实验，为生物化学和分子生物学研究提供高效、可控的实验工具。

产品名称：Difluorocarboxyfluorescein NHS Ester, 5-isomer

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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