CY5-Protein-A，CY5标记的蛋白A的反应机理

Cy5-Protein A 是一种通过荧光染料 Cy5 与蛋白A（Protein A）共价修饰形成的标记蛋白。Protein A 是金黄色葡萄球菌分泌的蛋白，能够高亲和力结合免疫球蛋白的 Fc 区域，因此在免疫学实验中常用于抗体纯化、免疫检测和分析。Cy5 是红色荧光染料，激发光波长约650 nm，发射光约670 nm，具有高荧光强度和稳定性。Cy5-Protein A 的形成使 Protein A 具备可视化功能，可用于免疫检测、细胞成像及结合实验。

化学结构特征

Cy5-Protein A 由两部分组成：

1. Protein A：蛋白质骨架含有多种反应性氨基、半胱氨酸等官能团，可作为共价修饰位点。Protein A 的 Fc 结合能力不受适度化学修饰影响，可保持其结合特性。

2. Cy5 荧光染料：Cy5 通常以 NHS 酯形式存在，能够与蛋白的氨基形成稳定的酰胺键。Cy5 提供红色荧光信号，可用于直接观察 Protein A 的分布、结合状态及免疫复合物形成。

反应机理

Cy5-Protein A 的共价标记主要依赖于氨基的亲核反应机制：

1. NHS 酯活化：Cy5 荧光染料末端通过 N-hydroxysuccinimide（NHS）形成活化酯，电子缺陷使其对亲核试剂敏感，特别是蛋白质赖氨酸残基上的氨基。

2. 亲核进攻：Protein A 上的氨基在碱性缓冲条件下表现为未质子化的亲核形式，可进攻 Cy5-NHS 酯的羰基碳，形成中间过渡态。

3. 酰胺键形成：经过质子转移和离去基团释放，NHS 被置换，氨基与羰基形成稳定的酰胺键，实现 Cy5 与 Protein A 的共价结合。

4. 调控修饰程度：通过调节 Cy5-NHS 与 Protein A 的摩尔比、反应时间和 pH，可控制标记密度，确保蛋白结合活性和荧光信号兼顾。

实验条件

典型反应在 pH 7.5–8.5 的缓冲液中进行（如 PBS），温和的室温条件下搅拌数小时，以避免蛋白质变性或 Cy5 光稳定性降低。反应完成后，通过透析、超滤或凝胶过滤去除未反应的 Cy5，实现纯化标记产物。

产品名称：Cy5-Protein A

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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