产品名称:2183473-25-6,BDP TMR azide的合成与纯化
1. 分子结构与特性
分子信息:分子式C₂₄H₂₇BF₂N₆O₂,分子量480.32,属于硼并吡咯烷酮(BDP)与四甲基罗丹明(TMR)复合荧光染料,末端含叠氮基团(-N₃)。
光学特性:激发波长542-545nm,发射波长570-574nm,量子产率0.64-0.95,光稳定性良好,适用于TAMRA通道成像。
物理性质:橙至棕色固体,溶于DMSO、DMF、乙醇等有机溶剂,水溶性良好,需-20℃避光干燥保存,避免反复冻融。
2. 合成策略
点击化学偶联:
铜催化环加成:通过叠氮基团与炔烃(如DBCO、BCN)在Cu(I)催化下发生环加成反应,实现生物分子(蛋白质、核酸)的特异性标记。
无铜点击化学:利用DBCO与叠氮的生物正交反应,避免金属催化剂毒性,适用于活细胞标记。
化学修饰路径:
NHS酯/氨基反应:BDP TMR的羧酸衍生物(如NHS酯)与生物分子氨基反应形成酰胺键。
马来酰亚胺/巯基偶联:与半胱氨酸巯基形成硫醚键,用于肽链或抗体修饰。
PEG间隔臂引入:通过PEG链(如PEG₄)提升水溶性与生物相容性,减少空间位阻。
3. 纯化方法
高效液相色谱(HPLC):
反相色谱(RP-HPLC):采用C4/C18柱,流动相为乙腈-水梯度(如20%→35%乙腈),检测波长545nm/570nm,纯度≥95%(HPLC/MS验证)。
离子交换色谱:分离带电杂质,如未反应的荧光染料或副产物。
薄层色谱(TLC):硅胶板检测偶联效率,Rf值对比确认产物纯度,<1%游离染料残留。
凝胶过滤色谱:Sephadex G-25柱分离大分子与小分子杂质,如游离叠氮或未偶联肽段。
重结晶:在低温有机溶剂(如乙醚)中结晶,提升固体纯度。

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