AF647-Chondroitin sulfate，AF647标记硫酸软骨素的反应机制

AF647-Chondroitin sulfate是一种荧光标记多糖化合物，由水溶性荧光染料Alexa Fluor 647（AF647）与硫酸软骨素（Chondroitin sulfate, CS）通过共价偶联形成。AF647具有吸收峰约为650 nm、发射峰约668 nm的特性，荧光信号稳定、光稳定性强且水溶性良好。硫酸软骨素是一种天然硫酸化多糖，由重复的二糖单元（N-乙酰半乳糖胺和葡萄糖醛酸）组成，分子链上含有大量羧基（–COOH）、羟基（–OH）及硫酸酯基（–OSO₃⁻），为荧光染料的共价偶联提供丰富反应位点。AF647标记后的硫酸软骨素既保持多糖结构特性，又具备可检测的荧光功能，可应用于生物材料研究、药物递送以及组织工程可视化研究。

反应机制概述

AF647与硫酸软骨素的偶联通常依赖AF647的活性衍生物形式（如NHS酯）与CS分子上的羧基发生化学反应。反应机制主要包括以下几个步骤：

1. 羧基活化
   硫酸软骨素分子链上含有大量羧基，是AF647偶联的主要反应位点。通过使用水溶性活化试剂如EDC（1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺），羧基被转化为O-活化中间体，形成活化酯。此步骤通常在弱酸至中性缓冲液（pH 5.5–7.0）中进行，以避免硫酸酯基和多糖链的降解。

2. 亲核攻击与酰胺键形成
   活化后的羧基中间体随后与AF647的氨基官能团发生亲核取代反应。氨基的孤对电子攻击羧基活化酯，形成稳定的酰胺键。该共价键将荧光染料固定在硫酸软骨素分子链上，使标记结构在水溶液体系中稳定且不易水解。

3. 副反应抑制
   反应过程中，由于CS分子上含有羟基及硫酸酯基，可能发生非特异性酯化反应。通过控制pH值、温度和AF647与CS的摩尔比，可最大限度提高酰胺化偶联效率，并减少副产物生成。通常使用缓冲体系（如MES缓冲液）和低温条件进行反应，以保护多糖骨架和硫酸酯基的完整性。

4. 反应完成与纯化
   偶联反应完成后，产物溶液中可能存在未反应的染料和活化试剂残留物。通过透析、凝胶过滤或高效液相色谱（HPLC）等方法可去除小分子杂质，获得高纯度的AF647-CS。纯化后产物保留荧光性能和多糖特性，可用于生物实验。

反应特点

• 选择性高：由于NHS酯与氨基反应速度快、特异性高，偶联主要发生在染料氨基与CS羧基之间，保证多糖其他官能团不受影响。

• 条件温和：反应在室温或轻微加温条件下进行，适合生物分子体系，减少多糖链降解风险。

• 可控偶联密度：通过调节AF647与CS的摩尔比，可控制荧光标记的数量，从而在保持CS生物功能的同时获得可观荧光信号。

产品名称：AF647-Chondroitin sulfate

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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