CY3-SS-31，花菁染料CY3标记靶向肽的纯化过程

CY3-SS-31 是由 Cyanine 3（Cy3）荧光染料 与 SS-31 靶向肽 共价结合形成的标记分子。Cy3 是一种可见光荧光染料，具有吸收峰约 550 nm、发射峰约 570 nm 的橙红色荧光，可在荧光显微镜、流式细胞术及光谱分析中使用。SS-31 是一种短肽，由特定氨基酸序列组成，具有线粒体靶向特性，可用于细胞内药物递送、分子示踪和靶向治疗研究。通过 Cy3 标记，SS-31 获得可视化荧光信号，使其在体外或体内实验中可直接追踪，便于分析肽的分布、摄取及定位行为。

化学结构与特性

CY3-SS-31 分子由两部分组成：

1. Cy3 荧光染料骨架

• Cy3 由两个吡咯环通过亚甲基链形成延长共轭体系，使分子在可见光区具有吸收和发射能力。

• 活性基团（如 N-羟基琥珀酰亚酯 NHS 或 maleimide）可与肽分子上的赖氨酸 ε-氨基或半胱氨酸巯基形成共价连接。

• 荧光性质稳定，可在显微镜及光谱分析中定量检测。

2. SS-31 肽骨架

• SS-31 为短肽，通常含有半胱氨酸和赖氨酸残基，氨基酸序列经过优化以实现线粒体靶向。

• 标记通常选择对肽靶向功能影响最小的氨基酸位点，如 N-端氨基或非关键赖氨酸。

• 标记后的 CY3-SS-31 保留肽原有的靶向能力及生物活性。

合成过程概述

CY3-SS-31 的合成主要通过肽与 Cy3 活性衍生物的共价反应实现，核心步骤如下：

1. 肽溶液准备

• 将 SS-31 肽冻干粉溶解于缓冲液（如 PBS、碳酸缓冲液）或干燥有机溶剂（如 DMSO），浓度通常为 1–5 mM。

• 溶液 pH 控制在中性或弱碱性（pH 7–9），提高氨基或巯基的亲核性，促进标记反应。

2. Cy3 活性衍生物溶液制备

• Cy3-NHS 或 Cy3-maleimide 需溶解于干燥的有机溶剂（DMSO、DMF），避免水分导致活性基团水解。

3. 反应混合

• 将肽溶液与 Cy3 活性衍生物按适当摩尔比混合（通常 Cy3 略过量）。

• 室温或轻微加温（20–37°C）反应 4–12 小时，避光搅拌以保护荧光性能。

4. 反应终止与初步处理

• 反应完成后，可使用透析、凝胶过滤或固相萃取去除未反应的 Cy3。

• 初步处理可减少副产物和自由染料对实验的干扰。

纯化过程

1. 高效液相色谱（HPLC）

• 反相 HPLC 常用于纯化 CY3-SS-31。

• 采用反相 C18 柱，梯度体系为水-乙腈，检测波长可选择 550 nm 荧光或 214 nm 紫外吸收。

• 收集目标峰后冻干，得到高纯度 CY3-SS-31。

2. 产物表征

• UV-Vis 光谱：吸收峰约 550 nm，确认 Cy3 核心结构完整。

• 荧光光谱：发射峰约 570 nm，验证荧光信号强度。

• 质谱（MS）或 HPLC：确认标记效率及分子量变化。

• SDS-PAGE 荧光扫描：可直观检测荧光标记肽分子。

实验注意事项

• CY3-SS-31 易光漂白，应避光低温保存（4°C 短期，-20°C 长期）。

• 标记反应应控制 pH 和溶剂环境，避免肽降解或染料水解。

• 纯化后产物可冻干储存，保证荧光信号稳定和靶向功能完整。

产品名称：CY3-SS-31 

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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