CY2-Pyridoxal phosphate，CY2-磷酸吡哆醛的纯化与表征

CY2-磷酸吡哆醛（CY2-PLP）是一种基于CY2荧光染料与磷酸吡哆醛（Pyridoxal Phosphate, PLP）偶联形成的功能性荧光探针。CY2属于类瑜珈染料（cyanine dyes）家族的短链衍生物，具有较高的量子产率和稳定的可见光荧光信号，其吸收峰通常在490–510 nm，发射峰在510–540 nm。引入磷酸吡哆醛后，探针不仅保留了CY2的光学特性，还具有PLP的化学活性，能够与氨基或半胱氨酸残基形成Schiff碱（亚胺键），实现蛋白质、多肽或功能性材料的共价标记。

CY2-PLP荧光探针兼具化学反应性和光学追踪能力，可用于生物体系中蛋白质追踪、酶活性分析及分子探针构建。磷酸基的存在增强水溶性和极性，使探针在水溶液和缓冲体系中均匀分散，避免非特异性吸附，并提高与生物分子偶联的效率。

纯化方法

1. 初步分离

• 合成反应后，产物体系通常包含未反应的CY2染料、PLP及偶联副产物。

• 可采用透析或硅胶柱层析初步去除小分子杂质和溶剂残留，获得粗纯的CY2-PLP。

2. 高效液相色谱（HPLC）纯化

• 反相高效液相色谱（RP-HPLC）是纯化CY2-PLP的主要方法。

• 以C18柱为固定相，水-乙腈梯度洗脱，结合磷酸盐或三乙胺缓冲体系，可有效分离目标产物。

• 流出峰的紫外吸收及荧光信号用于确认目标产物的收集区间。

3. 浓缩与储存

• 收集纯化峰后，通过旋转蒸发或冷冻干燥去除有机溶剂，得到干燥粉末或水溶液储存。

• 储存条件通常为避光、低温（–20℃或4℃）以保持荧光性能和化学稳定性。

表征方法

1. 光谱分析

• 紫外-可见吸收光谱（UV-Vis）：检测染料的吸收峰，CY2-PLP吸收峰通常在490–510 nm，可与未偶联染料区分。

• 荧光光谱（Fluorescence）：测定激发峰和发射峰，确认荧光性能是否保持，发射峰一般在510–540 nm。

• 荧光量子产率：与标准染料比较，评价偶联后荧光效率。

2. 质谱分析（MS）

• 电喷雾质谱（ESI-MS）可用于确定分子量和偶联产物结构。

• 质谱峰对应CY2染料与PLP偶联后的分子量，可区分未偶联起始物和副产物。

3. 核磁共振（NMR）

• ¹H-NMR和¹³C-NMR可用于确认化学结构，验证PLP的醛基与氨基或其他反应位点的偶联情况。

• 峰位及积分信息可反映偶联效率及化学纯度。

4. 高效液相色谱（HPLC）分析

• 分析纯化后产物的纯度，通常纯度要求在95%以上。

• 通过紫外-可见和荧光检测器联合确认目标产物。

5. 水溶性与稳定性测试

• 将CY2-PLP溶解于水或缓冲液中，观察荧光强度随时间变化，评估化学稳定性和光稳定性。

• 磷酸基的存在提高溶解性并减少非特异性聚集。

产品名称：CY2-磷酸吡哆醛

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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