CY5-磷酸吡哆醛，CY5-PLP的合成步骤概述

磷酸吡哆醛（Pyridoxal Phosphate, PLP）是维生素B6的活性形式，是一种含有磷酸基、醛基和吡啶环的生物小分子。PLP在生物体系中作为辅酶参与氨基酸代谢、转氨反应和其他酶催化反应。其结构特征包括吡啶环、4’-磷酸基和醛基，醛基可与氨基形成Schiff碱，为化学偶联提供反应位点。

CY5-PLP是一种功能化荧光分子，将近红外荧光染料CY5与PLP偶联形成的衍生物。CY5染料属于类瑜珈染料（cyanine dyes）家族，具有长共轭碳链结构，吸收峰约在675–680 nm，发射峰约695–710 nm，具有高强度、稳定的近红外荧光信号。通过将CY5染料与PLP偶联，可以同时实现光学追踪和化学反应功能，使其在蛋白质标记、酶活性分析及分子探针开发中具有广泛应用价值。

合成步骤概述

1. 原料准备

• CY5染料通常以末端羧基（CY5-COOH）或活化酯（如CY5-NHS）形式提供，保证能与PLP的氨基或醛基反应。

• PLP以磷酸吡哆醛形式存在，含活性醛基和磷酸基，需在水或缓冲体系中稳定存在，避免自发聚合或降解。

2. 反应策略选择

• 偶联方式主要基于PLP醛基的Schiff碱形成反应。

• CY5-NH2可与PLP醛基在轻微酸性或中性条件下发生缩合，形成亚胺键（Schiff碱）。

• 若需提高偶联稳定性，可使用还原剂（如NaBH₄或NaCNBH₃）将亚胺键还原为稳定的二级胺。

3. 偶联反应条件

• 溶剂：通常采用缓冲液（如PBS或磷酸盐缓冲液）溶解PLP和CY5衍生物，保证水溶性和反应均匀。

• pH条件：中性或轻微酸性（pH 6.5–7.5）有利于亚胺键形成，同时避免PLP降解。

• 温度与时间：室温条件下反应数小时至过夜，保证偶联效率同时保护染料和PLP的光学及化学性能。

4. 偶联反应步骤概述

1. 将CY5-NH2溶解于适宜缓冲液中。

2. 将PLP溶解并缓慢加入CY5-NH2溶液。

3. 在温和条件下搅拌，促使醛基与氨基形成亚胺键。

4. 若需要增强稳定性，可加入少量还原剂，将Schiff碱还原为稳定二级胺。

5. 纯化步骤

• 偶联反应后混合物含有未反应的CY5-NH2、未反应PLP及偶联产物。

• 可采用透析、凝胶过滤或反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离纯化。

• HPLC纯化结合紫外-可见和荧光检测，收集目标产物，去除副产物。

6. 表征方法

• 紫外-可见光谱（UV-Vis）：检测CY5吸收峰，确认染料核心未受破坏。

• 荧光光谱：测定发射峰位置和强度，评估荧光性能保持情况。

• 质谱（MS）：确认偶联分子量及纯度。

• 核磁共振（NMR）：验证亚胺键或还原后的二级胺形成及偶联位置。

产品名称：CY5-PLP

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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