FITC-维生素B2，FITC-Riboflavin的纯化方法

FITC-维生素B2（FITC-Riboflavin）是一种将异硫氰酸荧光染料（Fluorescein Isothiocyanate, FITC）与维生素B2（Riboflavin）偶联形成的功能性荧光分子。FITC染料属于可见光荧光染料，具有典型的激发波长约490–495 nm，发射峰约515–520 nm，光学信号稳定、量子产率高。通过偶联Riboflavin，可将其光学信号与生物活性结合，实现荧光追踪、酶反应监测及功能性分子探针构建。

维生素B2是一种水溶性维生素，由异黄素（isoalloxazine）环和核糖醇侧链组成。异黄素环平面共轭结构提供光学活性，核糖醇上的羟基或其他可活化位点可作为化学偶联位置。通过FITC标记，Riboflavin可以在生物体系中被追踪、定量分析或作为功能化探针用于细胞和分子研究。

合成过程概述

1. 原料准备

• FITC以活性异硫氰酸酯形式提供，可与Riboflavin分子上的胺基或经修饰的羟基反应。

• Riboflavin需进行羟基或胺基保护策略，以提高选择性偶联效率，避免副反应。

2. 偶联反应原理

• FITC的异硫氰酸酯官能团（–N=C=S）是高度亲电的，可与Riboflavin上的亲核氨基（–NH₂）形成稳定的硫脲键（–NH–C(=S)–NH–）。

• 反应温和，无需强酸或强碱，通常在中性或轻碱性缓冲体系中进行，保护Riboflavin结构完整。

3. 合成步骤

1. 溶解：将FITC溶解于有机溶剂（如DMSO）中，保证浓度适中，避免自聚。

2. Riboflavin准备：将Riboflavin溶解于缓冲液或水-有机混合溶剂中，若必要，进行羟基保护。

3. 偶联反应：将FITC溶液缓慢加入Riboflavin溶液中，室温或轻微加热搅拌数小时至过夜，使异硫氰酸酯与Riboflavin胺基反应生成硫脲键。

4. 反应监控：通过薄层色谱（TLC）或UV-Vis/荧光光谱监控反应进程，确认FITC-Riboflavin生成。

纯化方法

1. 初步分离

• 反应结束后，混合物含有未反应FITC、未反应Riboflavin及偶联产物。

• 可采用透析或凝胶过滤去除低分子量杂质，保留FITC-Riboflavin。

2. 高效液相色谱（HPLC）纯化

• 反相HPLC（C18柱）是主要纯化手段。

• 水-乙腈梯度洗脱，结合紫外-可见吸收（FITC吸收峰约490 nm）和荧光检测器收集目标产物峰。

• 确保纯化后产物纯度高、无杂质干扰。

3. 浓缩与储存

• 收集HPLC峰后，可通过旋转蒸发或冷冻干燥去除有机溶剂，得到干燥粉末或水溶液储存。

• 储存条件通常为避光、低温（–20℃或4℃），以保持荧光性能和化学稳定性。

产品名称：FITC-Riboflavin

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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