DSPE-PEG2000-FITC 修饰脂质体的制备及活体示踪性能研究

一、研究背景与意义

脂质体作为经典的纳米药物递送载体，具备生物相容性好、可包载多种类型药物等优势，但传统脂质体存在体内循环时间短、易被网状内皮系统（RES）清除、无法实时追踪递送过程等缺陷。DSPE-PEG2000 作为常用的脂质体长循环修饰材料，可通过空间位阻效应减少 RES 的识别与吞噬；而异硫氰酸荧光素（FITC）具有荧光强度高、激发波长适宜等特性，将其与 DSPE-PEG2000 偶联后修饰脂质体，既能赋予脂质体长循环特性，又可实现对载体的活体荧光示踪，为探究纳米载体的体内药代动力学和靶向递送行为提供可视化工具，对提升纳米药物递送系统的临床转化价值具有重要意义。

二、实验材料与方法

（一）实验材料

大豆卵磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-FITC（纯度≥95%）购自 Sigma-Aldrich 公司；透析袋（截留分子量 8000-14000 Da）购自上海源叶生物科技有限公司；昆明小鼠（SPF 级，6-8 周龄）购自北京维通利华实验动物技术有限公司；其余试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。

（二）DSPE-PEG2000-FITC 修饰脂质体的制备

采用薄膜分散 - 超声法制备修饰脂质体。精密称取大豆卵磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-FITC，按质量比 5:2:0.5 置于茄形瓶中，加入适量三氯甲烷 - 甲醇混合溶液（体积比 2:1），在 40℃水浴条件下旋转蒸发形成均匀脂质薄膜，真空干燥 12 h 以除去残留有机溶剂。向茄形瓶中加入 PBS 缓冲液（pH=7.4），水化 30 min 后，经探头超声仪超声处理（功率 300 W，工作 3 s、间歇 2 s，总时长 10 min），过 0.22 μm 滤膜整粒，即得 DSPE-PEG2000-FITC 修饰脂质体，4℃冷藏备用。

（三）表征及活体示踪性能检测

理化性质表征：利用动态光散射仪（DLS）测定脂质体的粒径、多分散指数（PDI）和 Zeta 电位；通过荧光分光光度计检测 FITC 的包封率；采用透射电子显微镜（TEM）观察脂质体的形态。

体外稳定性检测：将修饰脂质体置于含 10% 胎牛血清的 PBS 缓冲液中，于 37℃恒温摇床孵育，分别在 0、6、12、24 h 取样，测定粒径和荧光强度变化。

活体示踪实验：取健康昆明小鼠，尾静脉注射 DSPE-PEG2000-FITC 修饰脂质体（剂量为 10 mg/kg），分别在注射后 0.5、2、6、12、24 h，利用小动物活体成像系统采集小鼠体内荧光信号，分析荧光分布部位及强度变化；实验结束后处死小鼠，取心、肝、脾、肺、肾等脏器，进行离体荧光成像并定量分析。

三、实验结果与分析

（一）理化性质结果

制备的 DSPE-PEG2000-FITC 修饰脂质体呈球形或类球形，粒径分布均匀，平均粒径为 128.6±5.3 nm，PDI 为 0.121±0.015，Zeta 电位为 - 12.3±1.2 mV；FITC 包封率可达 89.7±2.1%，表明 FITC 可稳定结合于脂质体表面。

（二）体外稳定性结果

在含血清的缓冲液中孵育 24 h 后，修饰脂质体的粒径变化幅度小于 10%，PDI 无显著升高，荧光强度保留率仍在 80% 以上，说明该脂质体具备良好的体外血清稳定性，可满足体内递送的基本要求。

（三）活体示踪结果

活体成像显示，注射后 0.5 h，小鼠全身均有荧光信号，以血液丰富的脏器（心、肺）信号*强；2 h 后荧光逐渐向肝脏富集，但相较于未修饰 PEG 的荧光脂质体，其在血液中的滞留时间显著延长；6 h 后仍可在血液循环中检测到明显荧光，12 h 后荧光主要分布于肝脏和脾脏，24 h 后脏器荧光强度逐渐衰减。离体脏器成像结果与活体成像一致，且未在心脏、肾脏等脏器检测到异常高荧光累积，表明该修饰脂质体具有良好的体内长循环特性和生物安全性，同时 FITC 荧光信号可实现对脂质体体内分布的实时追踪。

四、讨论与结论

本研究采用薄膜分散 - 超声法成功制备了 DSPE-PEG2000-FITC 修饰脂质体，该载体兼具长循环和荧光示踪双重功能。理化性质表征证实其粒径适宜、分散性好、包封率高，体外稳定性实验表明其可抵抗血清蛋白的吸附和破坏；活体示踪实验则直观呈现了脂质体的体内循环过程和脏器分布规律，为后续探究脂质体介导的药物靶向递送机制提供了可靠的可视化手段。后续可进一步优化修饰比例，提升脂质体的靶向性，拓展其在肿瘤等疾病诊疗中的应用前景。