Sulfo Cy5.5 NHS ester 是磺化修饰的近红外荧光染料活性衍生物，因高水溶性和优良荧光特性，常用于生物分子标记等科研场景，以下是详细产品指南：

基础参数

核心优势

水溶性佳且生物相容性好：磺化修饰使其带负电，不仅能在水相反应体系直接使用，无需有机溶剂助溶，还能避免标记后引发蛋白质等生物分子疏水性聚集，保障标记产物稳定。

标记特异性强：NHS 活性酯基团可在温和条件下，与蛋白质、抗体、多肽等生物分子的伯氨基特异性反应形成稳定酰胺键，标记效率高。

适配近红外研究：发射波长处于肌体组织近红外窗口，生物组织穿透性强，且该波段背景荧光干扰低，光稳定性好，适合长时间成像观察。

适用场景常用于活体近红外成像、免疫荧光检测、流式细胞分析等。比如标记细胞膜蛋白实现受体内吞循环的实时追踪，修饰脂质体等纳米载体以观察药物摄取路径，也可用于细胞迁移分化追踪、多色流式细胞分选等科研场景。

使用与储存要点

使用：用 0.1M 磷酸盐缓冲液（pH8.3 - 8.5）作为反应体系，避免含氨基的 Tris 缓冲液；染料溶于无水 DMSO 后稀释使用，染料与目标分子摩尔比建议 4 - 12:1，反应在室温或 4℃下进行 30 - 60 分钟，后续用 1M Tris - HCl 终止反应，通过凝胶色谱等方式纯化产物。

储存：需在 - 20℃、干燥避光环境下保存，处于氮气等惰性气体环境；产品使用前需室温回温 20 分钟以上，避免频繁解冻，防止活性下降。

下面是Sulfo Cy5.5 NHS ester 标记蛋白的操作说明

Sulfo Cy5.5 NHS ester 是磺化修饰的近红外荧光染料，因高水溶性和特异性氨基标记能力，广泛用于蛋白荧光标记，以下为标准化操作流程及注意事项：

1、实验前准备

试剂与耗材

待标记蛋白（如抗体、白蛋白，需确保纯度＞90%，浓度≥1mg/mL）

Sulfo Cy5.5 NHS ester 染料（-20℃避光保存，使用前室温回温）

缓冲液：0.1M 磷酸盐缓冲液（PBS，pH 8.3-8.5，不含氨基）、1M Tris-HCl（pH 7.4，用于终止反应）

耗材：避光离心管、移液枪及无酶吸头、凝胶过滤柱（如 PD-10）或超滤管（3kDa/10kDa）

预实验处理

对待标记蛋白进行缓冲液置换，去除原体系中的氨基（如 Tris、甘氨酸），可通过超滤或凝胶脱盐完成，确保蛋白悬浮于 0.1M PBS（pH8.3-8.5）中。

染料溶解：取适量 Sulfo Cy5.5 NHS ester，用无水 DMSO 配制成 10mM 母液（现配现用，避免长时间暴露于空气和光照）。

2、标记反应操作

摩尔比确定根据蛋白分子量和氨基数量，确定染料与蛋白的摩尔比，常规比例为4:1~12:1（小分子蛋白取低比例，抗体等大分子取 6:1~12:1，避免过度标记导致蛋白聚集）。

反应体系配制在避光离心管中加入蛋白溶液，缓慢滴加配制好的染料母液，轻轻颠倒混匀（避免剧烈震荡导致蛋白变性），确保染料均匀分散。

孵育反应将反应体系置于室温避光条件下孵育 30~60 分钟，若为对温度敏感的蛋白，可在 4℃条件下延长孵育至 2 小时，全程避免光照。

终止反应向体系中加入 1M Tris-HCl（终浓度 50mM），室温孵育 10 分钟，终止未反应的 NHS 活性酯基团。

3、标记产物纯化

凝胶过滤法采用 PD-10 凝胶过滤柱，用 PBS 平衡柱子后上样，收集第一洗脱峰（含标记蛋白），弃去后续游离染料峰，该方法适用于大部分蛋白的快速纯化。

超滤法选用对应截留分子量的超滤管，加入反应液后 12000rpm 离心，弃去滤液（含游离染料），向截留液中补充 PBS 重复离心 3 次，直至滤液无明显荧光，适用于高浓度蛋白的浓缩与纯化。

4、标记效率检测与储存

效率检测通过紫外分光光度计分别测定 280nm（蛋白特征吸收峰）和 678nm（染料特征吸收峰）的吸光度，根据公式计算染料 / 蛋白结合比（D/P），理想 D/P 值为 2~5，过高易导致蛋白聚合。

成品储存纯化后的标记蛋白可分装保存于 - 20℃或 - 80℃避光环境，短期使用可 4℃冷藏，避免反复冻融，使用前需复温至室温并轻轻混匀。

5、注意事项

反应体系 pH 需严格控制在 8.3-8.5，pH 过低会降低 NHS 酯活性，pH 过高易导致染料水解失效。

全程操作需避光，防止染料荧光淬灭，影响标记效果。

若蛋白含游离巯基等活性基团，需提前封闭，避免非特异性结合。