Streptavidin,AF700 conjugate，链霉亲和素-AF700偶联物的合成路线

链霉亲和素-AF700偶联物（Streptavidin, AF700 Conjugate）是一种将链霉亲和素（Streptavidin）与荧光染料AF700（Alexa Fluor 700）通过化学偶联方法合成的复合物。该复合物常用于分子标记、免疫分析、荧光成像和细胞追踪等生物医学领域。AF700作为一种近红外荧光染料，具有较长的激发和发射波长（通常在 690-710 nm 范围内），适合用于多重标记和多色成像实验，尤其在深部组织成像和小动物体内成像中表现出色。

合成路线

合成链霉亲和素-AF700偶联物的核心步骤包括链霉亲和素和AF700染料之间的化学偶联反应。以下是该复合物常用的合成流程，结合了链霉亲和素与AF700染料的共价连接。

1. 链霉亲和素的准备

首先，需要准备链霉亲和素溶液。链霉亲和素通常是从Streptomyces avidinii菌株中提纯的四聚体蛋白。链霉亲和素的分子量约为60 kDa，每个分子能与一个生物素分子特异性结合。为了保证偶联反应的顺利进行，链霉亲和素需要在适当的缓冲液中进行稀释，通常使用磷酸盐缓冲液（PBS）或HEPES缓冲液，确保pH值在7.4左右。

2. AF700荧光染料的活化

AF700染料通常以NHS（N-Hydroxysuccinimide）酯的形式提供，具有一个活性酯基团，可以与链霉亲和素表面的氨基基团（如赖氨酸残基上的氨基）发生反应，形成稳定的共价键。首先，需准备AF700染料的溶液，通常使用DMSO或水将其溶解至所需浓度。AF700的溶液应当在冰上准备，以避免染料的降解。

将AF700染料溶液加入含链霉亲和素的溶液中，并保持反应在4°C下进行。这一过程需要小心控制染料与链霉亲和素的摩尔比，通常是1:1或者稍微过量的染料，以确保反应的高效性和偶联物的形成。

3. 偶联反应的进行

在低温条件下（通常为4°C），将AF700染料NHS酯与链霉亲和素溶液混合，并在1-2小时内进行反应。反应过程中，AF700的NHS酯基团会与链霉亲和素分子中的氨基（如赖氨酸上的氨基）发生亲核反应，生成稳定的共价偶联物。反应时，pH值通常需要保持在7.4-8.0，以优化反应速率和偶联效率。

此时，链霉亲和素的表面上的氨基与AF700染料的活性酯基团反应，形成链霉亲和素-AF700的共价连接。每个链霉亲和素分子可以偶联多个AF700染料分子，增加荧光强度。

4. 未反应染料的去除

反应完成后，使用透析或凝胶过滤的方法去除未反应的AF700染料。为了去除低分子量的游离染料，可以采用透析（使用适当孔径的透析袋，通常为10-30 kDa）将偶联物与未反应的染料分开，或使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）对偶联物进行洗脱。通常透析过程会持续几个小时，直到溶液中没有未反应的染料。

去除游离染料后，可以通过紫外-可见吸光光谱（UV-Vis）或荧光光谱测量确认偶联物的纯度和荧光强度。AF700染料的吸收峰大约在690 nm附近，发射峰则出现在710 nm附近。

5. 确认偶联效果与纯度

通过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）可以进一步分析链霉亲和素与AF700染料的偶联效果。SDS-PAGE能够显示偶联反应是否完全进行，并确定偶联物的分子量变化。此外，偶联物的荧光强度可以通过荧光分光光度计或激光扫描荧光仪进行定量分析，确保偶联物的荧光特性良好。

产品名称：链霉亲和素-AF700偶联物

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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