5'-Hexynyl Phosphoramidite，5'-己炔基核苷亚磷酰胺化物的反应步骤

5'-Hexynyl Phosphoramidite 的中文名称一般为5'-己炔基核苷亚磷酰胺化物，简称5'-Hexynyl 核苷亚磷酰胺。其中，5'-Hexynyl 表示在核苷 5’ 末端引入含三键的六碳烃链（–(CH₂)₄–C≡CH），提供末端炔基用于后续点击化学（Click Chemistry）偶联；Phosphoramidite 表示该分子含有 P(III) 活性磷酰胺基团，可用于固相寡核苷酸链的延伸和化学修饰。该修饰单体广泛应用于核酸功能化、荧光标记及药物偶联研究。

二、反应步骤

1. 溶解与预备
   将 5'-Hexynyl Phosphoramidite 溶解于无水有机溶剂中（如乙腈或二氯甲烷），确保体系干燥，避免磷酰胺水解。准备固相载体上的寡核苷酸链，并确认前一核苷酸的 5'-羟基已暴露，适合磷酰胺偶联。

2. 磷酰胺偶联反应
   将 5'-Hexynyl Phosphoramidite 与固相寡核苷酸上的 5'-羟基反应。通常加入活化剂（如四唑类试剂），促进 P(III) 位点的亲核加成，形成中间的磷酸三酯键。该反应选择性高、效率高，是固相 DNA 合成中的关键步骤。

3. 氧化/巯化步骤
   偶联完成后，通过氧化剂（如碘水溶液）将磷酸三酯氧化为稳定的磷酸二酯键，或者在特定条件下进行巯化生成硫代磷酸酯。此步骤确保寡核苷酸链的化学稳定性，同时保留末端 5'-Hexynyl 炔基的活性。

4. 去保护与清洗
   合成循环完成后，通过碱性处理去除核苷酸上可能的保护基（如苄氧基、DMTr 保护基等），使 5'-Hexynyl 炔基保持暴露且可用于后续偶联。固相载体用适当缓冲或溶剂清洗，去除未反应单体和副产物。

5. 后续功能化应用
   合成完成的 5'-Hexynyl 修饰寡核苷酸可直接参与点击化学（如 Cu(I) 催化的叠氮-炔环加成反应），与荧光染料、亲和标签、药物分子或其他功能分子共价偶联，实现多功能化核酸构建。六碳链的柔性结构提供空间延展性，减少对核酸构象和配对的干扰。

三、总结
5'-Hexynyl Phosphoramidite（5'-己炔基核苷亚磷酰胺化物）是一种用于固相寡核苷酸合成的功能化核苷酸单体。其反应步骤包括溶解与预备、磷酰胺偶联、氧化/巯化、去保护及后续功能化。末端炔基提供了高效的点击化学偶联位点，可用于荧光标记、亲和标签偶联和药物功能化。通过其灵活的空间结构和高化学活性，该修饰单体广泛应用于核酸化学、分子标记及功能化 DNA 构建研究。

产品名称：5'-Hexynyl Phosphoramidite

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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