产品名称：Streptavidin,Alexa Fluor405 conjugate的合成路径与关键控制参数

一、合成路径与关键控制参数

合成策略

NHS酯偶联法：Alexa Fluor 405-NHS酯与链霉亲和素在碱性缓冲液（pH 8.0-8.5）中反应，温度25-37℃，时间4-24小时，避光防止荧光淬灭。

纯化步骤：透析（截留分子量3.5-10 kDa）、C18反相HPLC梯度洗脱或尺寸排阻色谱（SEC）去除未反应染料和杂质，纯度≥95%。

关键控制参数

pH调控：偶联阶段pH 8.0-8.5，平衡NHS酯活性与蛋白稳定性；活化阶段（如EDC/NHS）pH 4.5-6.0，避免水解失效。

摩尔比优化：染料与蛋白摩尔比1:1至10:1，确保高效偶联同时保留生物素结合能力（通常染料:蛋白=3:1至5:1）。

溶剂体系：水相（PBS、生理盐水）或极性有机溶剂（DMSO、DMF），无水条件用于EDC/NHS活化。

温度与时间：室温至37℃，反应时间4-24小时，需通过TLC/HPLC实时监测反应进度。

二、荧光特性与光学性能

光学特性

激发波长405 nm（紫外/蓝光激光），发射波长421-450 nm（蓝色荧光），与DAPI、Hoechst等染料兼容，适合多色成像。

高光稳定性，适合长时间成像（如活细胞追踪、共聚焦显微镜观察）；pH不敏感性，适用于酸性或碱性实验环境。

荧光信号放大：结合酪胺信号放大（TSA）技术，可实现低丰度靶标（如低表达蛋白、核酸）的高灵敏度检测。

多模态兼容性

与GFP、FITC、Cy3、Cy5等染料兼容，适用于多色荧光显微镜、流式细胞术及荧光原位杂交（FISH）。

三、应用领域与优势

生物医学成像

荧光显微镜/共聚焦显微镜：标记生物素化的抗体、蛋白质或核酸，实现细胞/组织内生物分子的定位与动态追踪（如肿瘤细胞标记、神经元突触研究）。

流式细胞术：结合生物素标记抗体，实现多参数细胞分群（如CD3⁺/CD4⁺/CD8⁺ T细胞亚群分析），分辨率达0.1%。

荧光原位杂交（FISH）：检测特定DNA/RNA序列，用于基因表达、染色体定位研究。

免疫分析与分子生物学

ELISA/免疫组化：作为荧光探针提高检测灵敏度，减少非特异性背景。

蛋白质相互作用研究：通过生物素-链霉亲和素系统捕获靶蛋白，结合荧光信号定量分析。

纳米技术与材料科学

修饰纳米颗粒（如脂质体、金纳米颗粒）表面，构建靶向递送系统或荧光传感器。

结合其他功能分子（如靶向配体、治疗药物），实现诊疗一体化。

关于我们：

西安齐岳生物科技有限公司经营的产品种类包括有：近红外荧光染料、点击化学产品、合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯，二氧化硅及介孔二影产品，荧光蛋白及荧光探针等，欢迎咨询。

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