产品名称：CY5.5修饰次黄嘌呤，CY5.5-Hypoxanthine次黄嘌呤的偶联机制与连接位点

1. 合成策略与反应设计

偶联机制与连接位点

CY5.5特性：近红外二区荧光染料（激发波长~675 nm，发射波长~695 nm），含羧基（-COOH）或氨基（-NH₂），可通过EDC/NHS活化羧基形成活性酯，与次黄嘌呤的羟基（C6、C8位）或氨基（N1、N3位）形成稳定酰胺键/酯键。

次黄嘌呤活化：通过琥珀酸酐活化5'-羟基生成羧基，或利用4'-氨基经Boc保护后与CY5.5-NHS酯反应，避免非特异性偶联。

点击化学优化：采用SPAAC无铜点击化学（如叠氮-DBCO环加成），通过PEG链或短链烷基间隔臂减少空间位阻，提升荧光团与次黄嘌呤的电子耦合效率。

反应条件优化

环境控制：无氧/避光（氮气/氩气保护），室温至37℃，避免高温导致荧光淬灭或次黄嘌呤降解。

溶剂体系：水/有机混合溶剂（如PBS+DMSO），确保次黄嘌呤水溶性及CY5.5溶解性，防止聚集。

pH与时间：弱碱性环境（pH 7.5-8.5）平衡羧基活化与羟基/氨基活性，反应时间4-24小时，通过TLC/HPLC实时监测转化率（≥95%）。

2. 纯化策略与杂质去除

色谱分离技术

反相HPLC：C18柱梯度洗脱（乙腈/水+0.1% TFA），分离目标产物与未反应原料、副产物，纯度需≥95%。

离子交换色谱：利用CY5.5的负电荷特性，通过阴离子交换树脂去除带电杂质。

尺寸排阻色谱（SEC）：联用MALLS检测器，测定分子量及分布（PDI<0.2），确保均一性。

透析与超滤：3.5-10 kDa MWCO透析袋去除盐、溶剂残留；超滤离心管浓缩样品并去除小分子杂质。

点击化学纯化

若通过SPAAC偶联，需通过TLC或柱层析去除未反应的叠氮/环炔烃试剂，确保反应完全。

3. 质量控制与性能评估

结构验证

光谱分析：¹H NMR识别次黄嘌呤的芳香质子（δ 7.0-8.0 ppm）、CY5.5的亚甲基信号（δ 3.0-4.0 ppm）及连接位点酰胺键；FTIR检测CY5.5的C=N伸缩振动（~1600 cm⁻¹）、次黄嘌呤的N-H振动（~3300 cm⁻¹）。

质谱（MS）：MALDI-TOF MS测定分子量及端基结构；ESI-MS分析低分子量组分或降解产物，确认偶联成功。

荧光性能：测定激发/发射波长、量子产率及光稳定性，确保荧光信号强度与浓度正比，且无淬灭现象。

纯度与稳定性检测

HPLC纯度分析：反相HPLC验证纯度，排除未反应原料、副产物或降解产物。

稳定性测试：在模拟生理条件（pH 7.4, 37℃）或加速老化条件（40℃, 高湿）下，通过HPLC监测纯度变化，评估热、pH、光照稳定性。

生物活性验证：MTT法或克隆形成实验验证次黄嘌呤的生物活性保留率（如对嘌呤代谢酶的抑制活性），确保功能完整性。

关于我们：

西安齐岳生物科技有限公司经营的产品种类包括有：近红外荧光染料、点击化学产品、合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯，二氧化硅及介孔二影产品，荧光蛋白及荧光探针等，欢迎咨询。

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