产品名称：FITC-PSMA，Fluorescein-PSMA的影响因素

一、偶联反应条件的关键影响

反应参数优化

pH与温度：FITC的NHS酯在pH 6.5-7.5、室温（20-25℃）下与PSMA的氨基（如赖氨酸侧链）发生共价偶联，反应时间1-2小时。pH过高（>8.0）易导致NHS酯水解，降低偶联效率；温度过高（>37℃）可能引发PSMA变性。

试剂比例与浓度：FITC与PSMA的摩尔比通常为10:1至20:1，确保高标记率同时避免空间位阻。高浓度FITC可能引发自淬灭或非特异性结合，需通过预实验优化。

缓冲液成分

使用无氨基缓冲液（如PBS、HEPES），避免甘氨酸、Tris等含氨基物质竞争反应；添加少量有机溶剂（如DMSO）可增强FITC溶解度，但需控制浓度（<5%）以防PSMA变性。

纯化与质控

反应后通过透析、凝胶过滤（Sephadex G-25）或HPLC去除游离FITC，纯度≥95%；通过SDS-PAGE或质谱验证标记位点与分子量；荧光显微镜或流式细胞术确认荧光信号强度与均匀性。

二、荧光特性与稳定性管理

FITC的光物理特性

激发波长488nm，发射波长515-525nm（绿色荧光），量子产率约0.9，但易受光照、氧化剂（如过氧化物）或极端pH（<4或>9）影响发生荧光淬灭。需避光操作，添加抗淬灭剂（如ProClin 300）或抗氧化剂（如BHT）。

环境敏感性

在生理pH（7.0-7.4）、37℃下稳定，但高离子强度（如>150mM NaCl）或金属离子（如Cu²⁺）可能引发荧光减弱；还原性环境（如DTT存在）可保护巯基，但需避免与马来酰亚胺等反应基团冲突。

三、PSMA蛋白的稳定性与活性

PSMA的结构特性

PSMA为Ⅱ型跨膜糖蛋白，胞外段含锌离子结合位点（酶活性中心），对pH、温度及变性剂（如6M尿素）敏感。偶联后需确保酶活性保留≥80%，通过酶活性检测（如谷氨酸羧肽酶活性）验证。

储存与活性维持

短期（≤1周）4℃避光保存，长期需-20℃分装，避免反复冻融；溶解时使用无菌PBS（pH7.4）或含0.1% BSA的缓冲液，减少非特异性吸附。

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