产品名称:Cholera Toxin Subunit B, CF®594的优化策略
1. 合成与标记效率优化
高效偶联技术:采用点击化学(如DBCO/叠氮反应)或酶促连接(如转谷氨酰胺酶),提升连接效率及特异性,减少副反应。例如,通过铜催化点击反应实现mPEG与肝素的精准偶联,避免副反应。
染料/蛋白比例控制:严格调控染料与蛋白的比例(如3.5±0.5染料/蛋白),确保GM1结合活性保留率>98%(ELISA验证),并通过质谱检测标记位点一致性。
反应条件优化:在pH 8.5、4-25℃条件下进行反应,避免NHS酯水解或肝素活性位点失活;反应时间控制在30分钟至2小时(室温或4℃),通过TLC或质谱监控进度。
2. 稳定性管理
储存条件:-20℃以下干燥避光保存,避免反复冻融;水溶液添加5%甘油或0.02%叠氮化钠防腐,但需评估其对生物活性的影响。
光稳定性提升:选用光稳定性高的CF594染料(比传统TRITC光稳定性高7倍),减少光漂白,适合长时间成像(如连续数小时至数天)。
pH与温度耐受性:在pH 5-9范围内保持稳定,避免极端pH导致的降解;高温(如室温以上)或氧气暴露可能加速氧化降解,需低温避光操作。
3. 纯化与验证
纯化方法:采用透析、超滤或反相HPLC去除未反应染料和副产物,纯度需≥95%;通过Sephadex G-25凝胶过滤或C18柱纯化,确保产物纯度。
验证方法:通过ELISA验证GM1结合活性,质谱检测标记位点一致性;荧光光谱分析确认激发/发射波长(593 nm/614 nm)及荧光强度;SDS-PAGE荧光成像验证标记效率。
4. 应用优化
神经学研究:利用CTB特异性结合GM1神经节苷脂的特性,进行神经通路示踪(顺行/逆行运输),如脑成像中标记神经元投射路径。
细胞成像:适用于活细胞或固定细胞成像,标记脂筏和内吞过程;减少非特异性吸附,提高标记准确性。
多色成像:与绿色(如CF488A)、远红(如CF647)染料联用,实现多通道标记,信噪比高,串扰低,适合多参数检测(如流式细胞术、荧光显微镜)。

关于我们:
西安齐岳生物科技有限公司经营的产品种类包括有:近红外荧光染料、点击化学产品、合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯,二氧化硅及介孔二影产品,荧光蛋白及荧光探针等,欢迎咨询。
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