产品名称:CF®568 Succinimidyl Ester的合成与标记效率优化
1. 合成与标记效率优化
反应条件精准控制:
pH与温度:NHS酯活性在pH 8.0-9.0(碳酸盐缓冲液)、4-25℃时最佳,避免水解(pH<7或高温加速降解)或蛋白变性(>30℃)。
摩尔比优化:染料与蛋白比例控制在3:1至10:1,通过光谱法(A280/A568吸光度比)动态监测,避免过度标记导致活性丧失或聚集。
时间动力学:反应时间30分钟至2小时(室温),4℃可延长至4小时,通过TLC或质谱验证标记进程。
纯化与质量控制:
纯化策略:Sephadex G-25凝胶过滤、超滤(30kDa截留)去除游离染料;反相HPLC(C18柱)纯度≥95%,SDS-PAGE荧光成像验证标记效率。
活性验证:ELISA、荧光偏振实验或细胞结合实验确认标记后生物活性保留率≥90%(如α-Bungarotoxin与乙酰胆碱受体结合能力)。
2. 稳定性与生物相容性管理
储存条件:-20℃以下干燥避光保存,避免反复冻融;水溶液添加5%甘油或0.02%叠氮化钠防腐,需验证其对活性的影响。
环境耐受性:pH 5-9稳定,高温(>30℃)或氧化条件加速降解;光稳定性测试显示CF568光漂白速率比传统染料低50%,适合长时间成像。
生物相容性:细胞毒性评估(MTT法)确保无显著毒性;免疫原性控制(如抗染料抗体检测)避免长期使用引发的免疫反应。

关于我们:
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