FITC-Catalase，FITC-过氧化氢酶，制备方法

中文名称： 异硫氰酸荧光素-过氧化氢酶
英文名称： FITC-Catalase

制备方法说明：

FITC-Catalase 是一种荧光标记酶，由 过氧化氢酶（Catalase, CAT） 与 荧光染料 FITC（Fluorescein Isothiocyanate） 通过共价连接形成。该分子兼具酶催化活性与可视化荧光特性，可用于酶动力学研究、药物递送追踪及生物成像实验。制备过程主要涉及偶联反应、反应条件控制及纯化步骤。

1. 偶联原理
   FITC 含有活性异硫氰酸酯基团（–N=C=S），能够与蛋白质分子中的亲核氨基（主要是赖氨酸残基 ε-NH₂）发生亲核加成反应，形成稳定的 硫脲键（–NH–C(S)–NH–）。这种反应温和、选择性高，可在维持蛋白质天然构象的条件下实现荧光标记。

2. 反应条件控制

• 缓冲体系：常采用碳酸盐缓冲液或 PBS 缓冲液（pH 8–9），以保持过氧化氢酶活性并提供适合的氨基亲核环境。

• 温度与时间：反应通常在 4–25 ℃ 下进行 1–4 小时，避免高温引起蛋白质变性。

• 溶剂选择：FITC 可溶于少量 DMSO 或乙醇，随后缓慢加入蛋白溶液中，保证分子均匀分散，避免局部过量染料导致酶失活。

• 摩尔比调控：通过控制 FITC 与 Catalase 的摩尔比，可调节标记密度，既保证荧光信号，又尽量维持酶催化活性。

1. 纯化步骤
   偶联反应完成后，需要去除未反应的 FITC 以及低分子量副产物，以获得高纯度 FITC-Catalase：

• 透析法：利用分子量截留膜（MWCO 10–14 kDa）在 PBS 或去离子水中透析数小时至一天，去除游离 FITC。

• 凝胶过滤色谱（GFC）：可进一步分离高分子量标记产物与残余低分子杂质，提高纯度。

• 终处理：纯化后的 FITC-Catalase 可冻干储存或在低温、避光条件下溶解保存，防止荧光衰减和酶活性下降。

1. 产物验证与特性

• 紫外-可见光谱：检测 FITC 吸收峰（约 495 nm）与蛋白质吸收峰（约 280 nm），评估偶联效率。

• 荧光光谱：确认标记后酶的荧光活性。

• 酶活性测定：确保偶联过程中 Catalase 催化 H₂O₂ 分解能力保持良好。

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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