中文名：叠氮化聚乙二醇-马来酰亚胺（分子量 5000）
英文名：N3-PEG5000-Mal (Azide–PEG5000–Maleimide)

反应条件：
N3-PEG5000-Mal 是一种双功能化聚乙二醇（PEG）衍生物，一端为叠氮基（–N₃），另一端为马来酰亚胺（–Mal），分子量约 5000 Da。其结构特点赋予其高度的化学反应活性，可在温和条件下实现双端偶联：马来酰亚胺端选择性与巯基（–SH）形成稳定的硫醚键，而叠氮端可通过点击化学（CuAAC 或 SPAAC）与炔基（–C≡C）偶联，实现生物分子或纳米材料的双功能化。

马来酰亚胺端的反应条件通常要求温和的中性或弱碱性环境（pH 6.5–7.5），以保持马来酰亚胺的活性并避免水解。反应温度一般控制在室温至 37℃，反应时间通常为 1–4 小时，具体取决于巯基化合物浓度和反应体系的溶剂条件。水溶液体系中可使用 PBS 或其他生物缓冲液，而有机溶剂如 DMF 或 DMSO 亦可用于溶解疏水或难溶的巯基底物。由于马来酰亚胺对强酸或强碱敏感，应避免极端 pH 条件。

叠氮端的点击反应条件依反应类型而异：Cu(I)-催化的叠氮-炔烃环加成（CuAAC）在水相或有机/水混合溶液中进行，可使用 CuSO₄ 与还原剂（如抗坏血酸）产生 Cu(I) 活性中心，温度通常为室温至 50℃，反应时间为数小时至过夜。对于铜自由 SPAAC 反应，可在室温下直接与环炔（cyclooctyne）反应，无需催化剂，反应快速且温和，适合敏感生物分子体系。

溶剂选择对反应效率至关重要。马来酰亚胺端可在水、PBS 或少量有机溶剂（DMSO、DMF）中反应，但高比例有机溶剂可能影响蛋白质结构。叠氮端点击反应通常耐水溶液，可通过缓冲调节和温度控制实现高转化率。为了避免马来酰亚胺水解或叠氮氧化，反应一般在避光、低温或惰性气氛条件下进行。

反应后，常通过透析、凝胶过滤或柱层析去除未反应的 PEG、底物及金属离子，以获得高纯度的双功能化产物。产物的表征可通过核磁共振（¹H NMR）确认 PEG 链结构和端基存在，红外光谱（FT-IR）验证叠氮峰（~2100 cm⁻¹）及马来酰亚胺峰（~1690–1700 cm⁻¹），质谱（MALDI-TOF MS）可测定分子量。

总体而言，N3-PEG5000-Mal 的反应条件需兼顾两个活性端的化学性质：马来酰亚胺端在温和中性条件下与巯基偶联，叠氮端可在水相或有机/水混合体系下通过点击化学反应进行偶联。这种温和、可控的反应条件保证了双功能 PEG 在生物体系和纳米材料修饰中的高效应用。