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ATTO 425羧酸，652966-03-5，ATTO 425 carboxylic acid的操作规范

发布时间：2026-01-26 作者：wyh 分享到：

产品名称：ATTO 425羧酸，652966-03-5，ATTO 425 carboxylic acid的操作规范

一、操作规范：精准调控反应参数

缓冲体系与pH：

最佳反应pH 6.5-7.5（如PBS、HEPES缓冲液），避免Tris/甘氨酸等含游离胺的缓冲液；可添加0.1-0.5 mM EDTA螯合金属离子，减少氧化干扰。

羧基需通过EDC/NHS活化转化为活性酯，与氨基（-NH₂）发生酰胺化反应，偶联效率中等（约70%-80%），形成的共价键在生理环境下稳定。

温度与时间：

室温（20-25℃）反应30-60分钟为标准流程，低温（4℃）可延长至2-4小时以减少非特异性结合，避免高温（>37℃）引发蛋白变性或染料降解。

动态追踪场景（如活细胞成像）需控制反应时间≤30分钟，减少细胞损伤。

摩尔比控制：

染料与目标分子（如抗体、蛋白）摩尔比通常为2-5:1，通过紫外光谱法（A280蛋白吸收与ATTO 425特征峰A436/A439吸光度）计算F/P值，确保标记密度适中，避免过度标记导致蛋白聚集或活性丧失。

纯化与封闭：

反应后通过凝胶过滤（Sephadex G-25）、超滤（10-30 kDa截留）或透析纯化，去除游离染料及副产物，降低背景信号。

使用N-乙基马来酰亚胺（NEM）封闭未反应的巯基，减少非特异性结合。

二、安全注意事项：防护与废弃物处理

个人防护：操作时佩戴手套、护目镜，避免吸入、皮肤接触或食入；避免与眼睛接触，如发生需立即用大量清水冲洗并就医。

环境安全：保持实验环境通风良好，避免粉尘扩散；废液按实验室危险废物处理，禁止倒入下水道，需交由专业机构处理。

兼容性禁忌：仅限科研/工业用途，不可药用或食用；避免与强氧化剂、还原剂（如硫醇）或金属离子接触，防爆炸风险。

三、光学特性与化学性质

光谱参数：

激发波长424-439 nm，发射波长446-485 nm，量子产率约0.5-0.9，光稳定性中等（适合短期实验如15-20分钟快速成像），斯托克斯位移大（约28-46 nm），减少激发光干扰。

紫色荧光与长波长染料（如ATTO 488、ATTO 647）光谱间隔明显，适配多色共定位（如四通道以上同步成像）。

化学活性：羧基可衍生为NHS酯、马来酰亚胺等活性衍生物，适配不同标记需求（如靶向配体修饰、药物递送系统构建）。

四、应用场景与生物相容性

生物相容性：低细胞毒性，适用于活细胞成像、固定细胞染色及小动物活体成像；两性离子特性减少非特异性结合，适配超分辨率显微镜（如PALM、dSTORM）。

应用场景：

生物标记：标记抗体、核酸探针（如FISH）、蛋白质，用于免疫荧光、蛋白质相互作用研究及细胞骨架动态追踪。

高灵敏度检测：单分子检测、低丰度蛋白/核酸可视化（如肿瘤转移灶检测）。

信号放大系统：结合酪胺信号放大（TSA）技术，提升检测灵敏度，减少背景信号。

ATTO 425羧酸，652966-03-5，ATTO 425 carboxylic acid

关于我们：

西安齐岳生物科技有限公司经营的产品种类包括有：近红外荧光染料、点击化学产品、合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯，二氧化硅及介孔二影产品，荧光蛋白及荧光探针等，欢迎咨询。