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Alexa Fluor488 TCO，AF488 反式环辛烯的偶联机制的偶联机制

发布时间：2026-01-26 作者：wyh 分享到：

产品名称：Alexa Fluor488 TCO，AF488 反式环辛烯的偶联机制的偶联机制

1. 偶联机制：IEDDA反应

反应原理：

TCO与四嗪的环加成：TCO作为亲二烯体，与四嗪发生快速、特异性的[4+2]环加成反应，生成稳定的三唑环结构。反应速率常数达10⁵–10⁶ M⁻¹s⁻¹，远高于传统点击化学（如铜催化叠氮-炔烃环加成）。

生物正交性：反应在细胞内/外均不干扰正常代谢，无副反应，适用于活细胞、组织或动物体内的标记。

反应条件：

温和生理环境：pH 7-8.5、室温/37℃、水性缓冲液（如PBS）中即可进行，无需有机溶剂或高温。

无催化剂：避免金属离子（如铜）对生物分子的毒性或干扰。

2. 偶联流程与应用

预修饰步骤：

目标分子标记：蛋白质、抗体、核酸或纳米颗粒先通过四嗪基团修饰（如四嗪-PEG-NH₂），形成四嗪标记的底物。

AF488 TCO引入：AF488 TCO的TCO基团与四嗪修饰的底物发生IEDDA反应，形成共价偶联物，实现荧光标记。

应用场景：

活细胞成像：标记细胞表面受体、膜蛋白或胞内抗原，追踪细胞迁移、分裂等动态过程（如神经元轴突运输、肿瘤细胞侵袭）。

多色成像与流式细胞术：与AF555、AF647等染料组合，实现多通道定量分析；流式细胞术分选细胞群体，检测表面糖链表达差异。

药物开发与递送：标记药物载体（如脂质体、纳米颗粒），追踪体内分布与药效；在PROTAC（蛋白降解靶向嵌合体）中作为荧光探针，示踪靶蛋白降解过程。

疾病研究：标记病原体（如细菌、真菌）表面糖链，研究感染机制；监测癌细胞糖基化异常（如GlcNAc过表达）。

3. 优势与挑战

优势：

高效特异性：快速反应、低背景信号，提升检测灵敏度；生物正交性确保无干扰标记。

生物相容性：低细胞毒性，适合活体成像；水溶性好，减少非特异性吸附。

多功能扩展：可与FRET、生物素-链霉亲和素系统结合，构建多组分探针；适配荧光共振能量转移（FRET）技术。

挑战：

储存与稳定性：需避光、-20℃以下保存，防止荧光淬灭或染料水解；反应需精确控制pH、温度及时间，避免过度标记。

合成与纯化：需高纯度原料和严格纯化步骤（如HPLC、质谱验证），确保批次一致性；合成工艺需优化以提高产率、降低成本。

代谢与毒性评估：体内长期应用需评估代谢路径、潜在毒性及免疫原性。

Alexa Fluor488 TCO，AF488 反式环辛烯的偶联机制

关于我们：

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