牛血清白蛋白(无脂肪酸),BSA-FAF,反应步骤
中文名称:牛血清白蛋白(无脂肪酸)
英文名称:Bovine Serum Albumin (Fatty Acid-Free, BSA-FAF)
反应步骤
牛血清白蛋白(BSA)是一种广泛使用的血浆蛋白,脂肪酸去除后(BSA-FAF)能够提供更加纯净的蛋白环境,适用于偶联反应、酶标记和分子结合实验。其反应步骤通常以蛋白修饰或偶联为例,包括以下关键环节:
溶解与缓冲液准备
将无脂肪酸BSA粉末溶解在适宜缓冲液中(如磷酸盐缓冲液 PBS,pH 7.2–7.4),制备所需浓度(一般 1–10 mg/mL)。缓冲液应无还原剂或高浓度盐,以避免对蛋白结构和后续反应造成干扰。溶解过程中轻轻搅拌,避免剧烈振荡导致蛋白变性。蛋白浓度测定与预处理
使用紫外吸光法(A280 nm)或BCA/Bradford法测定BSA浓度,保证反应中蛋白量准确。若需要偶联,蛋白可通过透析或超滤除去低分子杂质,确保活性位点(如赖氨酸氨基或半胱氨酸巯基)可参与反应。偶联反应准备
根据实验需求选择偶联试剂,例如 NHS 酯、异硫氰酸酯、马来酰亚胺或醛类试剂。将试剂溶解在适宜溶剂中(如无水DMSO或PBS),控制摩尔比以避免蛋白过度修饰影响结构。反应进行
将蛋白溶液缓慢加入试剂溶液中,温和搅拌,通常在室温或 4 ℃ 进行数小时。此过程中,BSA 的氨基或巯基会与偶联试剂形成共价键,实现标记或功能化。温度、pH 和时间需要控制,以保持蛋白二级结构稳定。终止与纯化
反应完成后,可用透析、凝胶过滤或超滤方法去除未反应的试剂和副产物。最终得到纯化的BSA偶联产物,溶解在适宜缓冲液中保存。通常低温冷藏或冻干以延长保存期。验证与储存
通过 SDS-PAGE、紫外-可见光吸收、荧光或生物活性检测,验证BSA偶联效果。纯化后的无脂BSA可用于后续偶联实验、免疫检测或表面改性实验。
总的来说,牛血清白蛋白(无脂肪酸)作为反应底物,其核心优势在于 高纯度、去脂状态和多功能官能位点。偶联或修饰过程中,遵循缓冲条件控制、温和搅拌和纯化步骤,能够实现蛋白功能的保留和标记的高效性,为生化实验提供稳定可靠的基础。
纯度:95%+
性状:固体或液体
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家:齐岳生物

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