CY5-LDH 花青素CY5标记乳酸脱氢酶的制备方法-UDP糖丨MOF丨金属有机框架丨聚集诱导发光丨荧光标记推荐西安齐岳生物

CY5-LDH是一种将乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase, LDH）与红色荧光染料CY5偶联形成的标记酶复合物。乳酸脱氢酶是一种关键的代谢酶，催化乳酸与丙酮酸之间的相互转化，并在糖酵解和乳酸代谢中发挥重要作用。CY5是一种远红光荧光染料，激发波长约为650 nm，发射波长约为670 nm，具有高光稳定性、低背景自发荧光和良好的生物相容性。通过将CY5偶联到LDH分子上，可使LDH在体外或体内实验中具备荧光可视化功能，为酶动力学、代谢追踪及蛋白质相互作用研究提供直观工具。

化学结构与性质

CY5-LDH的偶联通常利用CY5的活性衍生物（如CY5-NHS酯或CY5-Maleimide）与LDH蛋白分子上的赖氨酸氨基或半胱氨酸巯基反应形成共价键。偶联后，LDH保留其催化活性，而CY5提供稳定的远红荧光信号。CY5-LDH在水溶液中可均匀分散，并可在各种缓冲条件下维持稳定的结构和荧光强度。其远红荧光特性适合在生物体系中进行深部成像和多通道荧光实验，与其他绿色或橙色荧光探针兼容。

制备方法

CY5-LDH的制备一般遵循温和的偶联策略，以避免酶活性损失：

将LDH溶解于适宜的缓冲液中（如pH 7.4的磷酸盐缓冲液），保持蛋白质稳定性；

将CY5活性衍生物溶解在少量有机溶剂中（如DMSO），缓慢加入LDH溶液中，反应通常在室温下进行数小时；

通过透析、凝胶过滤或超滤去除未反应的CY5分子及副产物，得到纯化的CY5-LDH；

使用紫外-可见光吸收和荧光光谱确认偶联效果，并通过酶活性测定验证LDH功能保持情况。

应用领域

酶活性研究与荧光检测
CY5-LDH可以在体外实验中用于酶动力学和底物转化研究。通过荧光信号，可实现对LDH分布及相互作用的定量监测，同时结合底物或辅因子，可研究酶催化过程的动力学特性。

代谢追踪与活性分析
LDH参与乳酸和丙酮酸之间的转化，是细胞糖酵解和乳酸代谢的关键节点。CY5-LDH的标记使其在细胞或组织体系中可追踪，帮助研究乳酸代谢通路及代谢酶的空间分布，为代谢研究提供可视化手段。

蛋白质相互作用研究
CY5-LDH可与其他蛋白质或小分子进行相互作用实验，利用荧光信号观察复合物形成、解离或空间分布情况。该方法可应用于酶-抑制剂研究或蛋白质复合物分析。

细胞和组织成像
CY5-LDH可用于细胞内或组织内LDH分布的成像。通过远红荧光信号，可观察酶在细胞质、细胞间或组织中的定位和动态变化，为细胞代谢研究提供直观数据。