花青素CY5.5标记链霉亲和素 CY5.5-Streptavidin的制备与使用方法-UDP糖丨MOF丨金属有机框架丨聚集诱导发光丨荧光标记推荐西安齐岳生物

CY5.5-Streptavidin是一种将链霉亲和素（Streptavidin, SA）与远红光荧光染料CY5.5偶联形成的功能化生物试剂。链霉亲和素是一种来源于放线菌的四聚体蛋白，具有高的生物素结合能力（结合常数K_d≈10^-14 M），因此在生物分析、分子标记、免疫检测和药物递送中被广泛应用。CY5.5是一种远红光荧光染料，激发波长约为675 nm，发射波长约为695–700 nm，具有高光稳定性、低背景荧光和良好的组织穿透力。通过将CY5.5与链霉亲和素偶联，可实现生物素-链霉亲和素体系的荧光可视化，为免疫标记、靶向成像、活体追踪和多通道分析提供重要工具。

化学结构与性质

CY5.5-Streptavidin由两部分组成：

链霉亲和素蛋白：四聚体蛋白结构，每个亚基可结合一个生物素分子，实现高亲和力的生物素捕获和定位功能。

CY5.5荧光染料：通过活性基团（如NHS酯或马来酰亚胺）与蛋白质中的氨基或巯基偶联，赋予蛋白远红光荧光信号。

偶联后的CY5.5-Streptavidin在水溶液中具有良好的溶解性和稳定的荧光信号，远红光特性使其在组织成像、细胞实验和多通道荧光分析中具有明显优势。荧光强度高、光稳定性好，可用于长时间观察和动态追踪。

制备与使用方法

CY5.5-Streptavidin的制备与使用一般包括以下步骤：

蛋白质溶液准备：将链霉亲和素溶解于适宜缓冲液（如PBS），保持蛋白稳定性。

荧光偶联：将CY5.5-NHS酯或CY5.5-Maleimide缓慢加入蛋白溶液中，通过氨基或巯基与蛋白共价结合，形成稳定的荧光标记产物。

反应条件控制：在室温或轻微搅拌条件下反应30分钟至数小时，避免蛋白质变性。

纯化：通过透析、凝胶过滤或高效液相色谱去除未反应的染料及副产物，获得纯化的CY5.5-Streptavidin。

验证：使用紫外-可见光光谱、荧光光谱和蛋白浓度测定验证偶联效率及荧光特性，同时检测其生物素结合活性是否保持。

应用领域

免疫标记与生物分析
CY5.5-Streptavidin可与生物素标记的抗体、蛋白或核酸结合，实现靶分子的荧光标记。通过荧光显微镜或流式细胞仪，可观察生物靶标的定位和表达情况，为免疫分析和分子检测提供可视化手段。

细胞与组织成像
远红光信号可穿透细胞和组织，减少自发荧光干扰，使CY5.5-Streptavidin适用于细胞内成像、组织切片观察以及活体成像实验，能够直观展示靶向分子分布。

多通道联合实验
CY5.5-Streptavidin的远红光信号可与绿色或橙色荧光染料联合使用，实现多重标记实验，观察不同分子或代谢物的同步分布与动态变化。

靶向药物递送研究
可将CY5.5-Streptavidin与生物素标记的纳米颗粒、脂质体或药物载体结合，实现体内追踪和释放监测，帮助研究靶向药物递送系统的效率与分布。