中文名称： 辣根过氧化物酶炔基

英文名称：HRP-Alkyne 

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

供应：西安齐岳生物科技有限公司

HRP-Alkyne是一种将辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）与炔基（Alkyne）功能化修饰的酶标化合物。辣根过氧化物酶是一种广泛应用于生物化学和分子生物学实验的氧化酶，能够催化过氧化氢（H₂O₂）对多种底物氧化反应，产生可检测的颜色、荧光或化学发光信号。通过在HRP上引入炔基，HRP-Alkyne实现了与含叠氮基（Azide）的分子通过“点击化学”（Copper-catalyzed Azide-Alkyne Cycloaddition, CuAAC）进行高效共价偶联的功能，从而拓展了HRP在多种生物标记、分子探针和生物分析中的应用范围。

化学结构与性质

HRP-Alkyne是通过在HRP分子表面氨基或赖氨酸残基上引入炔基衍生物而制备的功能化酶。炔基是末端不饱和羟烃基团，具有小体积、化学稳定且对蛋白质结构干扰小的特点。偶联后，HRP-Alkyne既保留了HRP的催化活性，又具备炔基的化学反应性，可与生物素-叠氮、荧光染料-叠氮或多肽/蛋白上的叠氮基团进行点击化学偶联。

HRP-Alkyne在水溶液中稳定，适合生物体系使用。其催化底物的能力（如TMB、OPD或荧光/化学发光底物）保持完整，同时炔基提供了方便的共价修饰和标记手段，使HRP在多功能化应用中具有高度灵活性。

制备方法

HRP-Alkyne的制备主要包括以下步骤：

1. HRP活性蛋白准备
   将HRP溶解于适宜缓冲液（如PBS或HEPES），保持蛋白稳定性，pH一般在7.0–8.0。

2. 炔基偶联
   通过NHS酯炔基、异氰酸酯炔基或其他炔基活性化合物与HRP上的赖氨酸或胺基残基发生共价反应。反应温和，通常在室温下进行数小时至过夜。

3. 纯化
   通过透析、凝胶过滤或离心分子筛去除未反应的炔基试剂及副产物，得到纯化的HRP-Alkyne。

4. 验证
   使用蛋白质含量测定、HRP活性检测以及点击化学反应试验验证炔基偶联成功与酶活性保持情况。

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