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基于荧光标记蛋白的细胞内蛋白追踪技术研究
发布时间:2026-03-13     作者:kx   分享到:

细胞内蛋白质的定位、转运与相互作用对解析生命活动具有重要意义。荧光标记蛋白通过基因融合表达,实现活细胞中靶蛋白的实时成像与动态追踪,可用于研究蛋白定位变化及细胞信号过程。西安齐岳生物提供多类型荧光标记蛋白及相关技术服务,为分子细胞生物学研究提供实验支持。


一、荧光标记蛋白核心特性对比表

荧光蛋白名称

激发波长(nm)

发射波长(nm)

核心优势

适用场景

EGFP(增强型绿色荧光蛋白)

488

509

亮度高、表达稳定、光稳定性适中,应用*广泛

常规蛋白定位、活细胞长期成像、多色标记基础通道

mCherry(红色荧光蛋白)

587

610

无寡聚化、光谱与GFP无重叠、细胞毒性低

双色/多色共定位、蛋白互作追踪、细胞器标记

EYFP(黄色荧光蛋白)

514

527

荧光强度高,pH稳定性较好,适配常规荧光显微镜

单细胞蛋白动态追踪、荧光共振能量转移(FRET)实验

mEmerald(绿色荧光蛋白变体)

487

509

光稳定性远超EGFP,折叠效率高,适合长时间成像

超长时程蛋白追踪、超高分辨率显微成像

TagBFP(蓝色荧光蛋白)

402

457

光谱范围独立,与红、绿荧光无串色,适合三色标记

多蛋白同时追踪、亚细胞器多重标记

 

二、常用荧光标记蛋白产品清单

产品名称

产品类型

规格

适用宿主细胞

备注

pEGFP-C1真核表达载体

载体质粒

10μg

哺乳动物细胞(HeLa、293T等)

含多克隆位点,可直接插入靶蛋白基因,组成型表达

pmCherry-N1融合表达载体

载体质粒

10μg

哺乳动物细胞

C端融合标记,不影响靶蛋白信号肽序列

EYFP重组表达质粒

载体质粒

10μg

哺乳动物细胞、酵母细胞

适合FRET及蛋白互作可视化研究

mEmerald荧光蛋白感受态

工程菌株

50μL×10

质粒扩增专用

高拷贝质粒扩增,提取效率高

TagBFP慢病毒表达载体

慢病毒载体

20μL

难转染细胞(原代细胞、干细胞)

感染效率高,可实现稳定株筛选

 

三、荧光标记蛋白产品订购流程

1. 需求确认:结合实验目的(蛋白定位/互作/动态追踪)、宿主细胞类型、成像设备,选定匹配的荧光标记蛋白产品,明确所需规格与数量,核对载体*性、荧光光谱与实验体系兼容性。

2. 订单提交:通过科研试剂平台、官方供应商官网或线下销售渠道,填写订购单,注明产品编号、名称、数量、收货信息、发票抬头及特殊需求(如质粒测序、无菌包装),提交订单并完成审核。

3. 支付与核对:按供应商要求完成费用支付,支付后核对订单信息,确认发货时间、物流方式,部分定制质粒需额外等待3-5个工作日的构建与验证周期。

4. 收货验收:收到产品后,立即核对产品名称、编号、规格、保质期及包装完整性,质粒类产品需低温储存,及时进行浓度测定、琼脂糖电泳验证,确保产品质量合格。

5. 售后与技术支持:若产品存在质量问题,7个工作日内联系供应商申请退换货;同步索取产品说明书、序列图谱及实验操作指南,咨询技术人员解决预实验难题。

荧光标记蛋白

四、典型案例分享

案例:基于EGFP-mCherry双色标记的细胞自噬蛋白LC3动态追踪研究

实验目的:探究哺乳动物细胞内自噬标志蛋白LC3在自噬发生过程中的定位与动态变化,区分自噬体与自噬溶酶体形成过程。

实验方法:构建EGFP-LC3与mCherry-LC3双融合表达载体,采用脂质体转染法将载体转入HeLa细胞,培养24h后,加入雷帕霉素诱导细胞自噬,利用激光共聚焦荧光显微镜进行活细胞实时成像,连续观测6h,记录双色荧光信号的定位与共定位变化。

EGFP-mCherry双色标记的细胞自噬蛋白


五、参考文献

1. Chalfie M, Tu Y, Euskirchen G, et al. Green fluorescent protein as a marker for gene expression[J]. Science, 1994, 263(5148): 802-805.

2. Shaner NC, Campbell RE, Steinbach PA, et al. Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein[J]. Nature Biotechnology, 2004, 22(12): 1567-1572.

3. Dean KM, Palmer AE. Advances in fluorescence labeling strategies for dynamic cellular imaging[J]. Nature Chemical Biology, 2014, 10(10): 823-833.

4. 张宁, 田烨. 荧光蛋白生物探针设计策略及其在细胞动态研究中的应用[J]. 遗传, 2025, 47(7): 711-728.

5. Betzig E, Patterson GH, Sougrat R, et al. Imaging intracellular fluorescent proteins at nanometer resolution[J]. Science, 2006, 313(5793): 1642-1645.

6. 李萌, 王健. 活细胞单蛋白荧光追踪技术的优化与应用进展[J]. 中国光学, 2026, 19(1): 45-58.



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