一、产品与技术介绍

Alexa Fluor 647（AF647）是Thermo Fisher旗下性能*的远红外水溶性荧光染料，作为传统Cy5染料的优选替代品，具备高亮度、高稳定性、低背景干扰、低非特异性结合的优势，适配免疫荧光、流式细胞术、活体成像等多类生物医学实验。西安齐岳生物深耕生物标记试剂研发，依托成熟共价偶联技术与严格质控体系，可提供AF647标记蛋白现货及*体、重组蛋白等定制标记服务，兼顾荧光信号与蛋白活性，满足高分SCI实验与科研课题的严苛需求。

二、Alexa Fluor 647蛋白标记方法

西安齐岳生物针对不同蛋白的结构特点、活性需求与应用场景，优化出两套核心AF647标记工艺，同时可提供定点标记、双标记等个性化方案，全程严控反应条件，*大限度保留蛋白天然活性与荧光性能，具体标记流程如下：

2.1 主流标记方式选择

• 胺基标记（NHS酯法，通用型）：采用AF647 NHS酯活性染料，与蛋白分子中赖氨酸侧链氨基及N端氨基发生共价偶联反应，是目前*常用、适配范围*广的标记方法。该方法操作高效、标记率可控，适合绝大多数*体、重组蛋白、载体蛋白等，适合批量制备，成本可控，标记度可精准调控在1-10染料/蛋白分子，兼顾荧光亮度与蛋白活性。

• 巯基标记（马来酰亚胺法，位点特异性）：针对蛋白活性位点敏感、需避免氨基修饰影响功能的场景，选用AF647马来酰亚胺活性染料，特异性结合蛋白半胱氨酸残基的巯基，实现定点标记，*大程度避免蛋白活性位点被屏蔽，适合酶、功能性受体、*原等对活性要求极高的蛋白标记，标记精准性更强，产物均一性更高。

2.2 标准化标记流程

1. 蛋白前处理：对原料蛋白进行纯度检测、缓冲液置换，去除游离胺类成分，避免干扰标记反应，确保蛋白处于*优反应体系；

2. 偶联反应：按照预设标记度，精准配比AF647活性染料与蛋白，在室温避光条件下进行共价偶联，严格控制反应时间与pH值，防止过度标记导致蛋白聚集或活性丧失；

3. 纯化除杂：采用分子筛层析、超滤脱盐、亲和纯化等组合工艺，彻底去除未反应的游离染料、小分子杂质，保证标记蛋白纯度≥95%；

4. 质控检测：通过紫外-可见分光光度法、荧光光谱法检测标记度、荧光强度，同步检测蛋白浓度、纯度与生物活性，出具完整质检报告；

5. 分装保存：根据客户需求，制备成液体或冻干粉剂型，-20℃避光分装保存，确保产品稳定性与运输安全性。

三、Alexa Fluor 647标记蛋白核心表现特点

3.1 光学性能*，检测灵敏度高

AF647*大激发波长约650nm，*大发射波长约665-668nm，处于远红外区间，生物组织自发荧光干扰极低，信噪比出众；量子产率高，荧光亮度远超传统Cy5染料，标记后荧光信号强，可实现低丰度蛋白、微量靶标的高灵敏检测；发射峰窄且对称，与Alexa Fluor 488、555、594等染料光谱分离度高，完美适配多色同步成像与多通道流式检测，无光谱交叉干扰。

3.2 稳定性极强，适配长时间成像

*光漂白性能突出，是Cy5染料的10-100倍，可耐受激光共聚焦显微镜长时间扫描、多次成像，荧光信号衰减极慢，适合活细胞实时示踪、长时间动态观察实验；pH稳定性极佳，在pH 3-11范围内荧光强度无明显波动，适配胞内酸性细胞器、胞外碱性环境等多种复杂生理体系，实验结果稳定性强、可重复性高。

3.3 生物兼容性好，蛋白活性保留完整

AF647染料为水溶性磺酸化结构，标记过程无需有机溶剂，不会导致蛋白变性、聚集；西安齐岳生物优化标记工艺，精准控制标记度，避免过度标记，确保蛋白的*原结合活性、酶催化活性、受体结合活性等保留率≥90%；非特异性结合率低，标记蛋白在细胞、组织样本中背景信号弱，靶标定位精准，无明显非特异性吸附。

3.4 应用场景广泛，适配多类实验体系

适配免疫荧光（IF/ICC）、免疫组化（IHC）、流式细胞术、蛋白印迹、活体小动物成像、蛋白互作分析、细胞糖基化检测等多种科研实验；可标记*体、重组蛋白、酶、凝集素、载体蛋白、多肽等各类生物大分子，满足基础医学、生命科学、药物研发等多领域科研需求，是高分SCI论文的常用荧光探针试剂。

四、科研案例分享

案例1：AF647-卵清蛋白（AF647-OVA）用于免疫学*原示踪研究	案例2：AF647标记*微管蛋白*体用于细胞骨架多色成像	案例3：AF647-花生凝集素（PNA）用于细胞表面糖基化检测
研究团队选用西安齐岳生物定制的AF647-OVA标记蛋白，作为模式*原进行小鼠树突状细胞*原摄取与呈递机制研究。	针对肿瘤细胞骨架与增殖标志物共定位检测课题，西安齐岳生物为客户完成*α-微管蛋白*体的AF647标记，搭配Alexa Fluor 488标记Ki-67*体，实现肿瘤细胞内细胞骨架与增殖蛋白的双色同步成像。	采用齐岳生物标准化AF647-PNA标记蛋白，开展肿瘤细胞表面特异性糖基表达定量研究。

五、西安齐岳生物AF647标记蛋白产品列表

西安齐岳生物提供标准化现货AF647标记蛋白产品，同时支持各类蛋白的AF647定制标记服务，部分核心现货产品如下，可提供不同规格分装，满足科研小试与批量实验需求：

六、西安齐岳生物AF647蛋白标记服务流程

齐岳生物打造全流程标准化、个性化的AF647荧光标记服务，从需求沟通到产品交付全程闭环管控，保障产品质量与服务效率，具体服务流程如下：

1. 需求沟通与方案确认：客户提供蛋白类型、纯度、浓度、标记量、应用场景、标记度要求等信息，技术团队评估蛋白可行性，制定专属标记方案，明确实验周期、报价与质控标准；

2. 样品寄送与预处理：客户寄送原料蛋白（或由齐岳生物提供原料蛋白），技术团队完成蛋白纯度检测、缓冲液置换、活性预评估等前处理工作；

3. 标记反应与纯化：严格按照标准化工艺开展AF647标记反应，完成多步纯化除杂，去除游离染料与杂质，确保产物纯度达标；

4. 全流程质控检测：开展荧光光谱、紫外吸收、蛋白浓度、标记度、纯度、生物活性等多项检测，出具详细质检报告，包含各项参数数据与光谱图；

5. 产品分装与交付：按照客户需求分装产品，搭配完整使用说明书、质检报告，通过冷链运输交付；

6. 售后技术支持：提供产品使用指导、实验方案优化、数据解读等售后技术服务，全程跟进客户实验进展，解决实验相关问题。

七、参考文献

1. Panchuk-Voloshina N, et al. Alexa dyes, a new generation of fluorescent dyes for biological imaging. J Histochem Cytochem. 1999;47(11):1473-1480.（Alexa Fluor染料奠基性文献，被引超15000次）

2. Haugland RP. Handbook of Fluorescent Probes and Research Products. Molecular Probes; 2005.（荧光探针领域权威手册，详解AF647性能与应用）

3. Lichtman JW, Conchello JA. Fluorescence microscopy. Nat Methods. 2005;2(12):910-919.

4. Koyama T, et al. Comparative analysis of Alexa Fluor 647 and Cy5 for long-term live-cell imaging. Anal Sci. 2010;26(1):99-100.